表达人CD47基因的巴马小型猪创建及其表达分析

发布时间：2017-09-29 09:29

  本文关键词：表达人CD47基因的巴马小型猪创建及其表达分析

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【摘要】：异种器官移植是解决供体器官短缺的有效途径之一,猪(Sus scrofa)是人类(Homo sapiens)异种器官移植的理想供体。然而,异种移植物进入受体后将被受体巨噬细胞清除,其主要原因是巨噬细胞表面的受体-信号调节蛋白α(singal regulatory proteinα,SIRPα)不能特异地识别异种细胞表面的整合素相关蛋白(integrin associated protein,IAP又称CD47),导致移植物细胞被受体内的巨噬细胞吞噬并清除。本研究在敲除α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase knockout,GTKO)的巴马小型猪基础上,转入h CD47基因,制备表达h CD47基因的GTKO/h CD47巴马小型猪,可避免超急性排斥反应并减弱受体巨噬细胞对移植物细胞的吞噬。首先构建巨细胞病毒增强子和鸡β肌动蛋白启动子(cytomegalovirus early enhancer/chickenβ-actin promoter,CAG)调控的h CD47基因表达载体p CAGGS-h CD47-Neo,转染GTKO巴马小型猪的耳成纤维细胞,然后通过体细胞克隆技术制备转基因克隆猪。利用PCR对克隆仔猪进行转基因鉴定,通过q RT-PCR、Western blot和免疫组化等方法分析h CD47在转基因猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺等组织的表达。抽取存活仔猪血液进行生理指标检测,监测其健康状况。通过体细胞克隆技术获得了13头转基因克隆猪,PCR鉴定均为h CD47基因阳性猪。q RT-PCR结果显示,h CD47基因在各器官中的表达量由高至低依次为胰腺、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏和心脏。Western blot及免疫组化结果进一步证实h CD47基因在胰腺、肝脏等中均具有较强表达,与q RT-PCR结果一致。血液生理指标显示,存活仔猪健康状况良好。本研究成功制备了表达h CD47基因的GTKO巴马小型猪,确证了h CD47基因在主要器官中的表达特征,将有助于探究h CD47基因在减弱受体巨噬细胞对异种移植各器官的排斥反应。
【作者单位】： 甘肃农业大学生命科学技术学院;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室;甘肃农业大学动物科学技术学院;
【关键词】： 整合素相关蛋白(CD) 异种移植 巨噬细胞 表达特征 巴马小型猪
【基金】：国家科技重大专项(No.2014ZX0801203B-002) 国家重点基础研究发展规划(973)项目(No.2015CB554103)
【分类号】：S865.1;R617
【正文快照】：

【参考文献】

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本文编号：941294