靶向人CD106基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

发布时间：2017-10-02 19:24

  本文关键词：靶向人CD106基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

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【摘要】：目的:构建人CD106基因RNAi慢病毒载体。方法:设计4条靶向CD106的RNA干扰靶点序列(Target 1、2、3、4),合成短发卡结构shRNA并退火成双链DNA,与慢病毒载体重组形成siRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定验证获得连接正确的克隆。经由293T细胞包装siRNA慢病毒颗粒,随后将其感染人口腔鳞癌HN12细胞,分别采用Real-time PCR和Western blot方法检测靶基因在mRNA和蛋白质水平的沉默效率。结果:构建的慢病毒载体的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度至少达到1×109TU/ml。siRNA慢病毒感染人HN12细胞,经Real-time PCR和Western blot检测目的基因CD106的mRNA和蛋白表达较阴性对照载体慢病毒感染组明显下降。结论:成功构建了人靶向CD106RNAi慢病毒载体,并能够在细胞水平上有效沉默靶基因。
【作者单位】： 滨州医学院附属医院口腔外科;滨州医学院附属医院内镜中心;青岛市东南口腔诊所;
【关键词】： CD RNA干扰 慢病毒载体
【基金】：山东省自然科学基金(编号:ZR2013HL008) 山东省教育厅科技计划项目(编号:J12LK08)
【分类号】：R739.8
【正文快照】： CD106(血管细胞黏附分子-1,vascular cell ad-hesion molecule-1,VCAM-1)是一种重要的细胞黏附分子[1]。既往研究认为:它主要分布在血管内皮细胞、巨噬细胞和树突状细胞表面,关于其作用的研究主要集中在免疫炎性反应[2],例如动脉粥样硬化[3]等,在恶性肿瘤的研究中尚不多见。Di

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本文编号：961407