BCR-ABL融合基因检测试剂盒质控品的建立

发布时间：2017-10-09 07:11

  本文关键词：BCR-ABL融合基因检测试剂盒质控品的建立

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【摘要】：目的:建立BCR-ABL融合基因质控品,评价人类BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能。方法:根据人类BCR-ABL e1a2和e14a2型融合基因m RNA序列,设计覆盖断裂点序列,合成目的融合基因序列。用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ对含有目的融合基因的质粒和表达载体进行酶切,连接酶切产物。将连接产物转化DH5α感受态细胞,筛选单个阳性菌落进行验证。将正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液。用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测。结果:PCR结果和测序结果表明成功构建人类BCR-ABL融合基因e1a2和e14a2型假病毒质粒;荧光RT-PCR结果表明构建的e1a2和e14a2型假病毒质粒能够表达目的 RNA,并且能被市售试剂盒正确检出,可以作为RNA质控品。结论:本研究建立人类BCR-ABL融合基因RNA质控品,用于评价BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能,为BCR-ABL融合基因相关白血病的临床诊断及靶向治疗提供指导。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院;河南省医疗器械检验所;中国科学院北京基因组研究所;大连晶泰医学检验所;
【关键词】： 靶向药物 分子靶向治疗 慢性粒细胞白血病标志物 埃布尔森小鼠白血病病毒癌基因同源物 BCR-ABL 融合基因 RNA检测 荧光逆转录-聚合酶链反应 基因检测试剂 标准物质研究
【分类号】：R440
【正文快照】： BCR-ABL;融合基因;RNA检测;荧光逆转录-聚合酶链反应;基因检测试剂;标准物质研究含有表达载体PAR-1的PAR-1/DH5α菌种,中国科学院北京基因组研究所;T4 DNA连接酶、限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ,美国New England Biolabs公司;TRIzol提取液,美国Invitrogen公司;2×GC buffer、Taq

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本文编号：998821