枯草芽胞杆菌9407TnYLB-1转座子突变体库的构建

发布时间：2017-11-07 01:02

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【摘要】：枯草芽胞杆菌9407(B9407)是1株对苹果轮纹病具有显著防效的生防菌株。为深入研究该菌株防病的分子机制,利用携带转座子TnYLB-1的温敏型质粒pMarA构建了B9407的突变体库。通过电击转化将pMarA转化至B9407,经过30℃培养,37℃转座诱变,50℃进行pMarA质粒消除,最后通过抗性筛选,获得3 500个转座子插入突变的单克隆,构建了B9407的突变体库。该转座子TnYLB-1的转座效率达到2.4×10-3,pMarA的质粒消除率达97.3%。随机挑选12株突变子进行PCR及Southern blotting杂交,结果表明:转座子TnYLB-1能够随机插入到B9407基因组上,大于90%的突变子为转座子单拷贝插入。B9407TnYLB-1转座子突变体库的构建为筛选和研究影响该菌株生防功能相关的基因并揭示其生防机制奠定了基础。
【作者单位】： 中国农业大学植物保护学院;
【基金】：高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20110008120013)
【分类号】：S476.1;Q78
【正文快照】： 转座子是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位[1],利用转座子随机诱变技术发现新基因和研究基因功能已经成为功能基因组学研究中的常用方法[2],尤其是Tn5、Tn10等可以随机转座的转座子已经在功能基因组研究中发挥了重要作用[3-4]。自20世纪80年代后,Tn917和Tn10类转

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本文编号：1150145