粘虫颗粒体病毒增效蛋白基因片段优化及功能

发布时间：2017-11-13 05:03

  本文关键词：粘虫颗粒体病毒增效蛋白基因片段优化及功能

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【摘要】：【目的】研究转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus,Pu GV-Ps)增效蛋白基因截短片段优化及其增效作用,探索增效蛋白基因的合理利用途径。【方法】生物信息学分析增效蛋白结构域,构建增效蛋白基因截短片段原核表达载体,分析目的基因片段表达产物的表达水平、围食膜蛋白降解效能和增强活性,进一步明确Pu GV-Ps增效蛋白基因的功能区域。【结果】Pu GV-Ps增效蛋白含有M60-like结构域、锌离子催化域和糖蛋白结合域,并包含13个潜在的糖基化位点。以此为依据设计P69(短截M60-like结构域)和P77(短截糖蛋白结合域)2个截短片段,构建了表达载体p ET15b-P69和p ET15bP77,原核表达量明显高于全长基因P104。表达产物纯化蛋白围食膜降解活性表明,P69对斜纹夜蛾围食膜大分子蛋白降解程度高于P77,但两者均低于P104。病毒增强苏云金杆菌(Bt)实验表明,截短片段的表达产物提高了Bt对小菜蛾的毒力,但增强活性显著低于P104。【结论】研究结果表明,Pu GV-Ps增效蛋白基因N端M60-like结构域和C端糖蛋白结合域对其增效作用的发挥都具有一定功能,这些结构对维持增效蛋白的构象也发挥了一定的作用,截短片段P69有利于保持Pu GV-Ps增效蛋白的活性、提高表达水平。该研究结果对增效蛋白的工业化生产具有一定的指导意义。
【作者单位】： 江苏里下河地区农业科学研究所;扬州大学园艺与植物保护学院;
【正文快照】： 杆状病毒(Baculovirus)是一类在自然界中仅感染节肢动物的病毒,绝大多数都来自于昆虫纲,且集中在鳞翅目昆虫[1]。杆状病毒是当前重要的生物控制因子,主要分为Alpha-,Beta-,Gamma-,Delta-baculovirus 4种[2]。转宿主粘虫颗粒体病毒(Pu GV-Ps)属于Beta-baculovirus,由美洲粘虫颗

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本文编号：1179181