西瓜食酸菌TA基因酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测

发布时间：2019-05-06 07:03

【摘要】：【目的】构建西瓜食酸菌TA基因的酵母双杂交诱饵载体,为探究TA基因编码产物参与西瓜食酸菌致病的机制奠定基础。【方法】通过PCR扩增TA基因,并定向克隆到载体p GBKT7,获得可用于酵母双杂交的诱饵载体p GBKT7-TA,经酶切鉴定和测序验证为正确后将p GBKT7-TA转化到酵母菌株AH109中;进一步用ADE2、HIS3、Lac Z报告基因活性检测法检测p GBKT7-TA的自激活作用,用固体及液体营养缺陷型培养基培养法检测p GBKT7-TA的毒性作用。【结果】诱饵载体p GBKT7-TA对酵母菌株AH109没有自激活及毒性作用。【结论】所构建的诱饵载体可用于酵母双杂交系统的后续工作,为进一步从被西瓜食酸菌侵染的黄瓜子叶c DNA文库中筛选与TA互作的蛋白奠定了基础。
[Abstract]:[objective] to construct yeast two-hybrid bait vector of watermelon acidobacteria TA gene, and to lay a foundation for exploring the mechanism of TA gene encoding product involved in pathogenesis of watermelon acidobacteria. [methods] TA gene was amplified by PCR and cloned into vector p-GBKT7,. The bait vector p-GBKT7-TA, which can be used in yeast two-hybrid, was identified by restriction enzyme digestion and confirmed by sequencing. Then p-GBKT7-TA was transformed into yeast strain AH109. Furthermore, ADE2,HIS3,Lac Z reporter gene activity assay was used to detect the self-activation of p-GBKT7-TA. The toxicity of p-GBKT7-TA was detected by solid and liquid nutrient deficient medium culture. [results] the bait vector p-GBKT7-TA had no self-activation and toxicity to yeast strain AH109. [conclusion] the bait vector constructed by this method has no self-activation and toxicity to yeast strain AH109. It can be used in the follow-up work of yeast two hybrid system, It lays a foundation for screening the proteins interacting with TA from c DNA library of cucumber cotyledons infected by watermelon acid bacteria.
【作者单位】： 新疆农业大学林学与园艺学院;新疆农业大学农学院;
【基金】：国家自然科学基金项目“细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)一个新型致病基因的作用机制研究”(31260419)~~
【分类号】：S432.4

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本文编号：2469975