东北黑土农田功能芽孢杆菌筛选及鉴定

发布时间：2020-06-27 21:03

【摘要】：芽孢杆菌(Bacillus spp.)是一类好氧或兼性厌氧,能产生抗逆性芽孢的革兰氏阳性细菌,具有种类多、遗传稳定性强,耐高温和抗逆性强等特性,是一类重要的资源微生物,包含许多具有特殊功能的菌株,可用于防治植物病虫害、促生和溶解土壤中难溶的含磷化合物等作用,在工业、农业和医学等科学领域有着十分广泛的应用前景。本文从不同有机质含量的东北农田黑土中分离、纯化芽孢杆菌,筛选具有生防和促生作用的芽孢杆菌,同时应用16S rDNA基因鉴定其系统发育关系和分类学地位。研究结果如下:1.采用平板梯度稀释法测定11个不同农田黑土中的芽孢杆菌数量,经1/2 NA培养基28℃培养后,芽孢杆菌数量在0.30×10~5-58.0×10~5 CFU/g之间,表明不同有机质含量黑土中芽孢杆菌在数量上存在显著差异。2.从不同农田黑土中分离纯化共获得550株芽孢杆菌菌株,采用改良Salkowski比色法测定结果显示,其中219株芽孢杆菌能产生不同浓度的IAA,占总数的39.8%,各菌株分泌IAA能力介于5-11μg·mL~(-1)之间。此外,对分泌IAA能力9μg·mL~(-1)的7株芽孢杆菌进行16S rDNA基因鉴定结果表明:2株属于赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus),5株属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。3.从550株芽孢杆菌中,采用平板对峙法,筛选出14株具有拮抗作用的菌株(占总数的3.0%),分别对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和腐皮镰孢菌(Fusarium solani)均有明显抑制作用,对上述病原真菌的抑菌半径分别在1.2-2.2 cm之间、1.5-2.8 cm之间和1.6-2.9 cm之间。16S rDNA基因鉴定结果表明:1株属于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、5株属于短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、1株属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、5株属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和2株属于高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)。4.从550株芽孢杆菌菌株中,采用溶磷圈法筛选得到10株具有解磷作用的菌株,其中菌株NH-4的解磷圈直径(D)与菌落生长直径(d)的比值最大为1.6。钼锑抗比色法测定供试菌株在磷矿粉培养液中溶磷量,结果显示培养3 d解磷能力为12.05-22.18 mg·L~(-1),培养6 d解磷能力为7.15-20.83 mg·L~(-1),与对照相比解磷量均有显著增加。经16S rDNA基因鉴定,8株属于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、1株属于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和1株属于短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。5.以ACC为唯一氮源法,从筛选得到的具有拮抗、分泌IAA、解磷作用的27株菌中获得9株具有ACC脱氨酶活性菌株,其中菌株NH-7的ACC脱氨酶活性最高,为0.162 U/mg。本研究筛选得到的550株芽孢杆菌菌株,其中27株芽孢杆菌具有生防和促生能力。6株能产生IAA、解磷并具ACC脱氨酶活性、3株具有解磷作用和ACC脱氨酶活性、12株具产IAA和拮抗作用和1株具有IAA和解磷作用、2株只具有拮抗作用和3株芽孢杆菌只具有产生IAA的能力。
【学位授予单位】：牡丹江师范学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S476.1
【图文】：

技术路线图

芽孢杆菌数量与土壤pH之间的关系

【参考文献】

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本文编号：2732098