滞育七星瓢虫抑制性消减杂交文库的构建及分析

发布时间：2020-10-17 07:18

　　七星瓢虫是优良的天敌昆虫,可凭滞育特性抵御逆境胁迫,提高种群生存能力。为研究七星瓢虫的滞育分子机制,构建抑制性消减杂交文库,经反向Northern斑点杂交技术进一步筛选,得到231个差异点。blastx/n比对后,正、反向文库分别得到差异表达基因64和54个,GO分类和PATHWAY分析表明,差异表达基因参与的生物过程涉及滞育的信号传导、生物合成、初级代谢和次级代谢等。文库中发现多种基因,为进一步筛选、克隆、分析滞育相关基因提供线索。着重讨论了与抗寒性相关的28 k D抗干燥应激蛋白、卵巢发育相关的Cullin 3蛋白,能量代谢相关的异柠檬酸脱氢酶的生物学功能,进而推测其与七星瓢虫滞育的相关性。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 供试试剂
    1.2 供试昆虫
    1.3 七星瓢虫总RNA提取及双链c DNA合成
    1.4 SSH-c DNA文库的构建
    1.5 反向Northern斑点杂交进一步确认差异阳性克隆
2 结果与分析
    2.1 样品总RNA浓度和完整性检测报告
    2.2 文库消减效率检测
    2.3 抑制性消减杂交文库插入片段的PCR鉴定
    2.4 SSH文库反向Northern斑点杂交
    2.5 生物信息学分析
3 讨论

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