丙环唑对核盘菌和指状青霉菌抑制作用的研究

发布时间：2020-10-20 10:29

　　 核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和指状青霉菌(Penicillium digitatum)都属于危害极大的死体营养型植物病原真菌,核盘菌引起油菜、花生、大豆等作物的菌核病,指状青霉菌引起柑橘绿霉病的发生。目前丙环唑在我国仅以混剂形式登记用于油菜菌核病的防治,对柑橘绿霉病的防治尚未登记。本论文主要研究了丙环唑对核盘菌和指状青霉菌的生物活性和对生理方面的影响,对科学利用丙环唑防治这两种病原菌具有一定的理论和实践指导意义。测定了丙环唑对采自安徽省的核盘菌的有效中浓度(EC_(50))值,建立了核盘菌对丙环唑的相对敏感性基线。2008年(N=75)和2014年(N=75)菌株EC_(50)值的频率分布均符合正态分布,K-S正态检验P值分别为0.119和0.502。2008年和2014年菌株的EC_(50)平均值分别为0.338±0.174μg/mL(SD)和0.315±0.135μg/mL(SD),两年之间无显著差异(P=0.375)。40μg/mL丙环唑对盆栽油菜菌核病保护作用防效为82.4%,80μg/mL的丙环唑对盆栽油菜上菌核病的治疗作用防效为50.7%。光学显微镜观察显示在含0.4μg/mL丙环唑的PDA上生长的菌丝与对照相比顶端分支增多,节间缩短。丙环唑可以显著(P0.05)提高核盘菌菌丝细胞膜的通透性和菌丝细胞内甘露聚糖的含量。丙环唑对118株指状青霉菌EC_(50)自然对数值的频率分布表明18株菌株已对丙环唑产生抗药性,抗性频率为15.25%,抗性倍数为2.7~6.5倍。丙环唑相对敏感菌株的EC_(50)平均值为0.104±0.039μg/mL(SD)。丙环唑和抑霉唑对指状青霉菌的EC_(50)值之间相关性显著(R~2=0.7537,P0.001)。200和400μg/mL丙环唑浸果处理后的柑橘储存40 d对绿霉病的防效分别为63.1%和84.3%。40和100μg/mL丙环唑浸果处理显著(P0.05)降低孢子产量和孢子的致病力。碘化丙啶对孢子染色观察结果显示在含有0.1μg/mL丙环唑的PDA上形成的孢子细胞膜完整性破坏率为25.6%。孢子萌发过程中丙环唑导致孢子细胞内活性氧累积。透射电镜观察发现经丙环唑处理的菌丝细胞壁增厚。与敏感菌株HBWH-22(EC_(50)=0.049μg/mL)和HBWH-26(EC_(50)=0.051μg/mL)相比,抗性菌株JXGZ-2(EC_(50)=0.429μg/mL)和JXGZ-179(EC_(50)=0.675μg/mL)丙环唑作用靶标酶基因CYP51的序列没有发现突变或重复序列插入,但CYP51基因的相对表达量分别是敏感菌株的1.57倍(P=0.029)和1.63倍(P=0.007)。
【学位单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TQ455.4;S432.44
【部分图文】：

O2，化学结构式见图1-1所示，丙环唑原药为淡黄色粘稠液体，易溶于有机溶剂。丙环唑具有很好的内吸输导作用，可以被根茎叶吸收并传导，其主要作用机制为抑制病原菌麦角甾醇合成从而影响细胞膜的正常结构与功能。丙环唑的杀菌谱非常广，对大多数的真菌都有理想的防治效果（李新杰和刘晓鹏 2005）。丙环唑1990年就开始在我国用于小麦全蚀病的防治（张炳炎等 1994），根据我国农药信息网（http://www.icama.org.cn/hysj/index.jhtml）上登记情况显示丙环唑已经应用于水稻纹枯病、稻瘟病、稻曲病、锈病，小麦白粉病、根腐病，香蕉叶斑病，莲藕叶斑病，苹果树褐斑病，玉米大斑病、小斑病，马铃薯早疫病，油菜菌核病等病害的防治中。丙环唑抗性发展比较缓慢

华中农业大学 2019 届硕士研究生（毕业）论文新鲜菌丝的 PDA 切成约 1 cm 1 cm 大小的菌块，用镊子轻，在光学显微镜下观察菌丝形态。环唑对核盘菌菌丝甘露聚糖含量的影响参照陈志颖等（2016）甘露聚糖含量测定的方法，稍有改动作：称取 0.040 g 甘露聚糖标准品，用 400mL 的无菌水溶 的甘露聚糖标准溶液。用移液枪分别吸取 0、0.2、0.3、0.9 mL的上述甘露聚糖标准溶液于10mL具塞试管中，以无菌%苯酚溶液，涡旋振荡，使反应体系充分混匀，立刻加入 5 液后将试管放在沸水中水解 20 min，取出冷却至室温，在波值，以甘露聚糖含量为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲

2.2.1 核盘菌对丙环唑的相对敏感性基线丙环唑对 2008 年和 2014 年各 75 株核盘菌菌株 EC50频率分布见图 2-2A，丙环唑对采于2008年的75株核盘菌菌株EC50值的频率分布通过统计软件SPSS（ver. 20）KS 正态性检验符合正态分布（P = 0.119），EC50值的分布范围为 0.067~0.756 μg/mL，平均值为 0.338 μg/mL 0.174（SD）。丙环唑对 2014 年 75 株核盘菌菌株的 EC50值通过统计软件 SPSS（ver. 20）KS 正态性检验同样符合单峰正态分布（P = 0.502），EC50值的分布范围为 0.094~0.551 μg/mL，平均值为 0.315 μg/mL 0.135（SD）。t检验发现两个年份菌株的 EC50值之间差异不显著（P = 0.375），说明两年的核盘菌菌株对丙环唑都是相对敏感的，没有出现敏感性下降现象。丙环唑对 2008 年和 2014年核盘菌菌株 EC50对数值的频率分布如图 2-2B，KS 正态性检验更加趋向单峰正态分布（P = 0.830，P = 0.909）。本试验中丙环唑对两个年份的核盘菌菌株 EC50值的频率分布可以作为核盘菌对丙环唑的相对敏感基线。
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本文编号：2848567