抗氟苯虫酰胺小菜蛾的转录组学和蛋白质组学研究
发布时间：2021-06-05 13:45
小菜蛾（Plutella xylostella L.）是鳞翅目世界性害虫,主要危害十字花科蔬菜,每年都会造成巨大的经济损失。目前小菜蛾几乎对所有化学杀虫剂都产生了抗药性。自氟苯虫酰胺问世以来,由于不合理的用药使得小菜蛾对该药剂抗药性发展迅速。为探讨小菜蛾对氟苯虫酰胺的抗性机制,本项目以敏感品系S、室内筛选的氟苯虫酰胺抗性品系Rh、田间抗性种群Rb和槲皮素处理的氟苯虫酰胺抗性品系QRh四个品系/种群为研究对象,分别利用RNA-seq和iTRAQ进行组学测序,对获得的数据进行比较分析,为揭示抗性小菜蛾的生物学特征,小菜蛾抗性和敏感品系在转录和蛋白水平上的差异,和小菜蛾对氟苯虫酰胺抗性机理研究提供有力的支持。研究结果如下:1.在前期研究的基础上,以实验室筛选的氟苯虫酰胺抗性品系,反向汰选获得4946位点为GAG纯合基因型的抗性品系,再进一步进行氟苯虫酰胺选择压抗性汰选,获得抗性倍数为1889.82倍的基因型为GAG的小菜蛾抗氟苯虫酰胺品系（Rh）。测得小菜蛾田间抗性种群（Rb）对氟苯...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
信息分析流程图
图 2 信息分析流程Fig2. Bioinformatics Analysis Pipeline谱数据经过相应工具转换成 mgf 格式文件后，用蛋白质鉴定软件库搜索鉴定。质控分析同时进行以判断本次数据是否合格。数据合阈值，得到最终可信的蛋白质鉴定结果。随后进行 iTRAQ 定量分选出我们更为关心的显著差异蛋白。在有重复实验的情况下，定量次定量数据质量是否达到标准。最后会进行 GO、Pathway、COG白的 GO、Pathway 富集分析。 iTRAQ 定量 数据的定量我们采用华大自主研发的 IQuant（Wen et al., 2014）软ascot Percolator（Brosch et al., 2014）算法，该算法采用机器学习算结果进行重新打分，从而提高结果的鉴定率。首先在谱图/肽段水（PSM-level FDR<=0.01），从而获得显著性鉴定的谱图和肽段列表
图 3 氟苯虫酰胺抗性品系总 RNA 检测Fig.3 Detection of flubendiamide-resistance strain total RNA：1～12 敏感品系 4 龄小菜蛾单头虫体总 RNA 提取结果（重复 12 次 The results of total RNA isolation from single-headed larvae of the fourth-xylostella in susceptible strains, 12 replicates增片段的检测%琼脂糖凝胶电泳检测目的片段 PCR 扩增结果（图 4），目的条增条带，无引物二聚体，目的条带大小约为 110bp，表明本次，可用于后续测序实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]氯虫苯甲酰胺对小菜蛾鱼尼丁受体基因mRNA表达量的影响[J]. 孙丽娜,杨代斌,芮昌辉,崔丽,袁会珠. 农药学学报. 2012(02)
[2]转录组研究新技术:RNA-Seq及其应用[J]. 祁云霞,刘永斌,荣威恒. 遗传. 2011(11)
[3]蛋白质组技术在昆虫抗药性机理研究中的应用[J]. 程滨,程罗根,罗勋. 安徽农业科学. 2008(21)
[4]甜菜夜蛾对氯氟氰菊酯抗性的表皮穿透机理[J]. 刘永杰,沈晋良. 昆虫学报. 2003(03)
[5]昆虫解毒酶解毒机理及其在农药污染治理中的应用[J]. 黄菁,乔传令. 农业环境保护. 2002(03)
[6]表皮穿透和GABAA受体不敏感性在小菜蛾对阿维菌素抗性中的作用[J]. 吴青君,张文吉,张友军,徐宝云,朱国仁. 昆虫学报. 2002(03)
[7]棉铃虫对氰戊菊酯抗性机理研究[J]. 吴益东,沈晋良,谭福杰,尤子平. 南京农业大学学报. 1995(02)
博士论文
[1]贵州白背飞虱抗药性动态监测及其抗性相关基因的转录组学分析[D]. 金剑雪.贵州大学 2017
[2]小菜蛾对Bt Cry1Ac毒素抗性的分子机制研究[D]. 郭兆将.中国农业科学院 2016
[3]抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠蛋白质基因组学研究[D]. 朱勋.华中农业大学 2014
[4]淡色库蚊抗药性比较蛋白质组学研究[D]. 王卫杰.南京医科大学 2014
本文编号：3212277
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
信息分析流程图
图 2 信息分析流程Fig2. Bioinformatics Analysis Pipeline谱数据经过相应工具转换成 mgf 格式文件后，用蛋白质鉴定软件库搜索鉴定。质控分析同时进行以判断本次数据是否合格。数据合阈值，得到最终可信的蛋白质鉴定结果。随后进行 iTRAQ 定量分选出我们更为关心的显著差异蛋白。在有重复实验的情况下，定量次定量数据质量是否达到标准。最后会进行 GO、Pathway、COG白的 GO、Pathway 富集分析。 iTRAQ 定量 数据的定量我们采用华大自主研发的 IQuant（Wen et al., 2014）软ascot Percolator（Brosch et al., 2014）算法，该算法采用机器学习算结果进行重新打分，从而提高结果的鉴定率。首先在谱图/肽段水（PSM-level FDR<=0.01），从而获得显著性鉴定的谱图和肽段列表
图 3 氟苯虫酰胺抗性品系总 RNA 检测Fig.3 Detection of flubendiamide-resistance strain total RNA：1～12 敏感品系 4 龄小菜蛾单头虫体总 RNA 提取结果（重复 12 次 The results of total RNA isolation from single-headed larvae of the fourth-xylostella in susceptible strains, 12 replicates增片段的检测%琼脂糖凝胶电泳检测目的片段 PCR 扩增结果（图 4），目的条增条带，无引物二聚体，目的条带大小约为 110bp，表明本次，可用于后续测序实验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]氯虫苯甲酰胺对小菜蛾鱼尼丁受体基因mRNA表达量的影响[J]. 孙丽娜,杨代斌,芮昌辉,崔丽,袁会珠. 农药学学报. 2012(02)
[2]转录组研究新技术:RNA-Seq及其应用[J]. 祁云霞,刘永斌,荣威恒. 遗传. 2011(11)
[3]蛋白质组技术在昆虫抗药性机理研究中的应用[J]. 程滨,程罗根,罗勋. 安徽农业科学. 2008(21)
[4]甜菜夜蛾对氯氟氰菊酯抗性的表皮穿透机理[J]. 刘永杰,沈晋良. 昆虫学报. 2003(03)
[5]昆虫解毒酶解毒机理及其在农药污染治理中的应用[J]. 黄菁,乔传令. 农业环境保护. 2002(03)
[6]表皮穿透和GABAA受体不敏感性在小菜蛾对阿维菌素抗性中的作用[J]. 吴青君,张文吉,张友军,徐宝云,朱国仁. 昆虫学报. 2002(03)
[7]棉铃虫对氰戊菊酯抗性机理研究[J]. 吴益东,沈晋良,谭福杰,尤子平. 南京农业大学学报. 1995(02)
博士论文
[1]贵州白背飞虱抗药性动态监测及其抗性相关基因的转录组学分析[D]. 金剑雪.贵州大学 2017
[2]小菜蛾对Bt Cry1Ac毒素抗性的分子机制研究[D]. 郭兆将.中国农业科学院 2016
[3]抗Cry1Ac杀虫晶体蛋白近等基因系小菜蛾中肠蛋白质基因组学研究[D]. 朱勋.华中农业大学 2014
[4]淡色库蚊抗药性比较蛋白质组学研究[D]. 王卫杰.南京医科大学 2014
本文编号：3212277
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