灰飞虱NADPH-细胞色素P450还原酶基因克隆及RNAi功能分析
发布时间：2021-06-22 20:16
灰飞虱Laodelphax striatellus （Fallen）是水稻和小麦等农作物上的一种重要害虫,它的危害方式分为两种：一是通过刺吸方式取食作物,造成组织损伤； 二是携带病毒至水稻、小麦等作物上引发病毒病。21世纪之前灰飞虱在我国几乎没有发生,未引起农业生产者的足够重视,只是在防治褐飞虱（Nilaparvata lugens）与白背飞虱（Sogatella furcifera）的过程中对其进行协同兼治。近年来,灰飞虱在我国大部分稻区特别是江苏、安徽等地频繁暴发。面对其大面积发生,人们主要通过化学药剂进行防治。但由于农药的不合理使用,灰飞虱抗性得到不断上升,灰飞虱频繁大发生与其抗药性的升高紧密相关。鉴于农药使用导致田间抗性水平不断提高,以及过量使用农药带来的一系列环境与社会问题,开辟害虫防控新途径是当今植物保护领域迫在眉睫的一项科研任务。鉴于此,本文首先克隆分析潜在的靶标基因,探索目标基因的沉默是否导致灰飞虱死亡,从而挖掘重要的靶标基因,为利用现代生物学技术防控灰飞虱提供重要的基因材料和方法启示,为更好地进行灰飞虱抗性治理和新药开发提供新的依据。一、灰飞虱NADPH-细胞色素P4...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 文献综述
1 灰飞虱生物学特性
2 灰飞虱的发生规律和防治方法
2.1 发生世代和历期
2.2 田间发生规律
2.3 危害特点
2.4 灰飞虱大发生的原因
2.5 化学防治在灰飞虱防控中的作用
3 细胞色素P450酶系
3.1 细胞色素P450
3.2 NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)
3.2.1 CPR的功能
3.2.2 CPR的物种间同源性分析
3.2.3 细胞色素P450介导的昆虫抗性研究
4 RNA干扰技术
4.1 RNA干扰的定义
4.2 RNA干扰的分子机理
4.3 RNA干扰的应用现状
4.4 RNAi在生命科学研究中的作用
4.5 RNAi技术方法探讨
4.5.1 昆虫摄入dsRNA的方式
5 本文研究的目的和意义
第2章 灰飞虱NADPH-细胞色素P450还原酶全长克隆及序列分析
摘要
前言
1 试验材料
1.1 供试昆虫及饲养
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器设备
2 试验方法
2.1 灰飞虱总RNA提取
2.2 RNA质量的检测
2.2.1 引物设计
2.2.2 cDNA第一链的合成及基因克隆
2.2.3 PCR扩增灰飞虱体内LSCPR片段
2.3 PCR产物纯化回收
2.4 连接反应
2.5 转化反应
2.6 LSCPR的cDNA全长的获得
2.6.1 5’和3'RACE cDNA模板的合成
2.6.2 NADPH-细胞色素P450还原酶RACE引物
2.7 RACE-PCR反应体系及条件
2.8 目标序列的测定
3 结果分析
4 讨论
第3章 灰飞虱NADPH-细胞色素P450还原酶RNAI功能分析
摘要
1 材料与方法
1.1 供试昆虫
1.2 主要仪器及试剂
1.3 试验方法
1.3.1 RNA提取
1.3.2 第一链cDNA的合成
1.3.3 dsRNA合成引物
1.3.4 PCR扩增
1.3.5 回收纯化
1.3.6 dsRNA合成
1.3.7 dsRNA喂食实验
1.3.8 实时荧光定量PCR
2 结果
2.1 dsRNA双链的合成
2.2 灰飞虱NADPH-细胞色素P450还原酶RNAi、定量检测和表型分析
3 讨论
全文结论及创新点
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫的RNA干扰[J]. 杨广,尤民生,赵伊英,刘春辉. 昆虫学报. 2009(10)
[2]昆虫细胞色素P450与抗药性关系研究进展[J]. 杨帆,王进军. 四川动物. 2008(03)
[3]灰飞虱对几类杀虫剂的抗性和敏感性[J]. 马崇勇,高聪芬,韦华杰,沈晋良. 中国水稻科学. 2007(05)
[4]灰飞虱种群数量变动规律与模型测报技术研究[J]. 汪恩国. 植物保护. 2007(03)
[5]灰飞虱重发原因及水稻条纹叶枯病控制技术[J]. 顾本奇,顾卫中. 上海农业科技. 2006(06)
[6]灰飞虱种群暴发成灾原因剖析[J]. 刘向东,翟保平,刘慈明. 昆虫知识. 2006(02)
[7]水稻条纹叶枯病暴发原因及其防治对策研究[J]. 吴雪芬,张国彪,林茂松,陈军. 中国农学通报. 2005(02)
[8]我国杂交粳稻发展现状、问题及其对策[J]. 褚庆全,齐成喜,杨飞,刘学军. 作物杂志. 2005(01)
[9]亚洲稻区灰飞虱抗药性研究进展[J]. 林友伟,张晓梅,沈晋良. 昆虫知识. 2005(01)
[10]小麦不同栽培方式对水稻黑条矮缩病及传毒昆虫灰飞虱发生的影响[J]. 王藕芳,包生土. 植保技术与推广. 2001(01)
本文编号：3243471
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 文献综述
1 灰飞虱生物学特性
2 灰飞虱的发生规律和防治方法
2.1 发生世代和历期
2.2 田间发生规律
2.3 危害特点
2.4 灰飞虱大发生的原因
2.5 化学防治在灰飞虱防控中的作用
3 细胞色素P450酶系
3.1 细胞色素P450
3.2 NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)
3.2.1 CPR的功能
3.2.2 CPR的物种间同源性分析
3.2.3 细胞色素P450介导的昆虫抗性研究
4 RNA干扰技术
4.1 RNA干扰的定义
4.2 RNA干扰的分子机理
4.3 RNA干扰的应用现状
4.4 RNAi在生命科学研究中的作用
4.5 RNAi技术方法探讨
4.5.1 昆虫摄入dsRNA的方式
5 本文研究的目的和意义
第2章 灰飞虱NADPH-细胞色素P450还原酶全长克隆及序列分析
摘要
前言
1 试验材料
1.1 供试昆虫及饲养
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器设备
2 试验方法
2.1 灰飞虱总RNA提取
2.2 RNA质量的检测
2.2.1 引物设计
2.2.2 cDNA第一链的合成及基因克隆
2.2.3 PCR扩增灰飞虱体内LSCPR片段
2.3 PCR产物纯化回收
2.4 连接反应
2.5 转化反应
2.6 LSCPR的cDNA全长的获得
2.6.1 5’和3'RACE cDNA模板的合成
2.6.2 NADPH-细胞色素P450还原酶RACE引物
2.7 RACE-PCR反应体系及条件
2.8 目标序列的测定
3 结果分析
4 讨论
第3章 灰飞虱NADPH-细胞色素P450还原酶RNAI功能分析
摘要
1 材料与方法
1.1 供试昆虫
1.2 主要仪器及试剂
1.3 试验方法
1.3.1 RNA提取
1.3.2 第一链cDNA的合成
1.3.3 dsRNA合成引物
1.3.4 PCR扩增
1.3.5 回收纯化
1.3.6 dsRNA合成
1.3.7 dsRNA喂食实验
1.3.8 实时荧光定量PCR
2 结果
2.1 dsRNA双链的合成
2.2 灰飞虱NADPH-细胞色素P450还原酶RNAi、定量检测和表型分析
3 讨论
全文结论及创新点
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫的RNA干扰[J]. 杨广,尤民生,赵伊英,刘春辉. 昆虫学报. 2009(10)
[2]昆虫细胞色素P450与抗药性关系研究进展[J]. 杨帆,王进军. 四川动物. 2008(03)
[3]灰飞虱对几类杀虫剂的抗性和敏感性[J]. 马崇勇,高聪芬,韦华杰,沈晋良. 中国水稻科学. 2007(05)
[4]灰飞虱种群数量变动规律与模型测报技术研究[J]. 汪恩国. 植物保护. 2007(03)
[5]灰飞虱重发原因及水稻条纹叶枯病控制技术[J]. 顾本奇,顾卫中. 上海农业科技. 2006(06)
[6]灰飞虱种群暴发成灾原因剖析[J]. 刘向东,翟保平,刘慈明. 昆虫知识. 2006(02)
[7]水稻条纹叶枯病暴发原因及其防治对策研究[J]. 吴雪芬,张国彪,林茂松,陈军. 中国农学通报. 2005(02)
[8]我国杂交粳稻发展现状、问题及其对策[J]. 褚庆全,齐成喜,杨飞,刘学军. 作物杂志. 2005(01)
[9]亚洲稻区灰飞虱抗药性研究进展[J]. 林友伟,张晓梅,沈晋良. 昆虫知识. 2005(01)
[10]小麦不同栽培方式对水稻黑条矮缩病及传毒昆虫灰飞虱发生的影响[J]. 王藕芳,包生土. 植保技术与推广. 2001(01)
本文编号：3243471
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