核盘菌C2H2型锌指蛋白SsZFH1的功能研究

发布时间：2021-08-16 21:06

　　核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary）是一种世界性的植物病原真菌,其寄主范围十分广泛,每年都造成巨大的经济损失。在致病过程中,核盘菌能够形成侵染结构——侵染垫,以利于其附着并刺穿寄主植物表面。此外,核盘菌能够合成并分泌草酸与细胞壁降解酶类等致病相关因子,以利于其抵御寄主防卫反应并侵染寄主植物。C2H2型锌指蛋白是真核生物中最大的转录因子超家族,但真菌中的相关研究较少。C2H2型锌指蛋白的功能主要集中于生长发育、分生孢子形成、有性生殖、致病性、耐药性以及胁迫应答等方面。核盘菌SsZFH1蛋白在氨基酸序列的C端含有1个C2H2型锌指结构域,故属于C2H2型锌指蛋白家族。本研究克隆得到Sszfh1基因上游944 bp序列（L）与下游929 bp序列（R）,将上下游序列连接至敲除载体pXEH上以得到pXEH-L-R重组质粒,将重组质粒转入野生型核盘菌原生质体内对Sszfh1基因进行敲除,经过抗性筛选与PCR检测后得到两株Sszfh1基因敲除突变体菌株。本研究构建了Sszfh1基因回补载体pNDH-OGG-Sszfh1,将该载体转入Sszfh1基因敲... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

核盘菌生活史示意图

2.1 Sszfh1 基因的获取与生物信息学分析通过 FungiDB 数据库，可获取 Sszfh1 基因的序列信息；通过 NCBI Protein数据库可获得 Sszfh1 基因的结构域信息；通过 BLASTP 程序与 Smart BLAST 程序可对 Sszfh1 基因进行序列比对分析。2.2 重组载体的构建本实验室存有基因敲除载体 pXEH，该载体带有丝状真菌启动子 PtrpC，并带有潮霉素抗性标记基因。潮霉素抗性标记基因的上游和下游分别有两个多克隆位点，将 Sszfh1 基因上游（L）及下游（R）片段分别酶切并连接至潮霉素抗性标记基因的上游和下游的两个多克隆位点可得到重组的敲除载体 pXEH-L-R，基于同源重组的 Sszfh1 基因敲除策略如图 2.1 所示。

图 3.1.2 SmartBLAST 程序比对结果g 3.1.2 Analysis of SmartBLAST prog验证H-L-R 的酶切验证内切酶（Bgl Ⅱ/EcoR I 与 Sal I/Hind ，以未酶切的 pXEH-L-R 质粒作为阴中进行电泳实验，实验结果如图 3.2.Sclerotinia sclerotiorumDrosophila melanogaster(2)Drosophila melanogasterDanio rerioHomo sapiensMus musculus

【参考文献】：
期刊论文
[1]核盘菌转录因子SsMCM1原核表达与亚细胞定位[J]. 王雪亮,刘言志,吕兴明,张艳华,张祥辉,刘金亮,潘洪玉,张鑫生.  植物病理学报. 2019(01)



本文编号：3346394