东方粘虫中肠V-ATP酶A、B亚基基因克
发布时间：2021-12-10 11:08
东方粘虫Mythimna separatea(Walker)属鳞翅目,夜蛾科,是禾本科作物的主要害虫。东方粘虫中肠上皮细胞刷状缘膜囊泡(Brush Border Membrane Vesicles,BBMV)中有一种Ⅴ型H+ATP酶,将ATP水解时产生的能量形成质子梯度来调节细胞内的pH环境。近些年越来越多学者已经将V-ATP酶作为药物靶标来研究。本研究针对东方粘虫中肠BBMV中V-ATP酶A和B亚基进行研究,对东方粘虫中肠BBMV中V-ATP酶A亚基基因(vatpa)和B亚基基因(vatpb)进行了克隆、原核表达及复性纯化。主要结果如下:利用Trizol法提取东方粘虫中的总RNA,通过反转录和聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增,得到cDNA,然后以这条序列为基础,设计3’端和5’端特异性引物,再利用快速扩增技术(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)克隆得到东方粘虫中肠BBMV的3’端和5’端序列,最后通过拼接得到vatpa的cDNA全长序列,该核苷酸序列共2180 bp,包含一个长1854 bp的开...
【文章来源】： 西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 东方粘虫研究概述
1.2 V-ATP酶结构研究进展
1.2.1 V1部分的亚基
1.2.2 V0部分的亚基
1.3 V-ATP酶生物学功能研究进展
1.4 本研究的目的及意义
1.5 本研究的设计思路
第二章 东方粘虫中肠vatpa cDNA的克隆
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 东方粘虫中肠总RNA的提取和检测
2.2.2 东方粘虫中肠vatpa中间片段PCR扩增和检测
2.2.3 东方粘虫中肠vatpa 3'RACE扩增与检测
2.2.4 东方粘虫中肠vatpa 5'RACE扩增与检测
2.2.5 东方粘虫中肠vatpa RACE序列验证
2.2.6 东方粘虫中肠vatpa cDNA全长拼接及分析
2.2.7 东方粘虫中肠vatpa系统进化树分析和氨基酸序列比对
第三章 东方粘虫V-ATP酶A、B亚基原核表达载体构建
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 PCR扩增东方粘虫vatpa和vatpb及鉴定
3.2.2 东方粘虫vatpa和vatpb的PCR产物回收
3.2.3 原核表达载体pET-22b(+)质粒的提取与双酶切检测
3.2.4 原核表达载体pET-22b(+)的回收
3.2.5 原核表达载体pET22b-vatpa及pET22b-vatpb的构建与鉴定
第四章 东方粘虫中肠vatpa和vatpb诱导表达及复性纯化
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 东方粘虫中肠vatpa和vatpb氨基酸序列预测目的蛋白的基本参数
4.2.2 重组pET22b-vatpa的诱导表达及SDS-PAGE检测分析
4.2.3 重组pET22b-vatpb的诱导表达及SDS-PAGE检测分析
4.2.4 重组pET22b-vatpa及pET22b-vatpb蛋白的复性及检测
4.2.5 重组pET22b-vatpa及pET22b-vatpb蛋白的Ni柱纯化及检测
第五章 结论
第六章 讨论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]陆地棉纤维中GhGMPase2基因克隆、序列分析及原核表达 [J]. 赛富涛,禄亚洲,王斐,钱雯婕,李鸿彬. 西北农业学报. 2013(12)
[2]大豆GmNAC8基因克隆与原核表达 [J]. 刘晓庆,徐照龙,许玲,黄益洪,何晓兰,张大勇,马鸿翔. 江苏农业学报. 2013(04)
[3]人膜蛋白CD81的原核表达与纯化 [J]. 朱海珍,雷少华,刘春艳,焦宇,于晓妍,高益敏. 湖南大学学报(自然科学版). 2012(08)
[4]新城疫病毒HN09-69株P基因的克隆、序列分析及表达 [J]. 陈礼朋,王忠田,岳旭龙,王泽仁,高文明,李双亮,张宇耕,崔保安,李新生. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(02)
[5]粘虫与防治 [J]. 姬宪明. 现代农业. 2011(06)
[6]棉花脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆、原核表达与纯化 [J]. 李学宁,杜军伟,李鸿彬. 石河子大学学报(自然科学版). 2010(05)
[7]包涵体蛋白复性的几种方法 [J]. 罗惠霞,李敏,王玉炯. 生物技术通报. 2007(05)
[8]东方粘虫的识别、预测与防治方法 [J]. 刘恩志. 安徽农学通报. 2004(03)
[9]V-ATPase:结构、功能及其在肿瘤细胞中的作用 [J]. 卢小东,覃文新,杨胜利. 生命科学. 2004(02)
[10]生物农药的作用、应用与功效(二)——植物和动物源农药 [J]. 高菊芳. 世界农药. 2001(02)
硕士论文
[1]中华蟾蜍与日本蟾蜍皮肤galectin-3 cDNA的克隆、序列分析及原核表达[D]. 徐跃.浙江农林大学. 2012
[2]亚洲玉米螟中肠Bt毒素结合位点及V-ATPase A亚基基因与抗性的关系研究[D]. 李宁.中国农业科学院. 2012
[3]茶树L组UDPG-糖基转移酶基因的克隆及原核表达[D]. 田艳维.安徽农业大学. 2012
[4]新疆红肉苹果PGIP基因的克隆及原核表达[D]. 孙华.山东农业大学. 2012
[5]斜纹夜蛾SL-1细胞色素C基因的克隆及其原核表达[D]. 张丹.华中师范大学. 2012
[6]人脂联素球状结构域（gAd）的原核表达、纯化及生物活性检测[D]. 黄敏.山西医科大学. 2010
[7]家蚕V-ATPase B亚基和6PGL基因的研究[D]. 杨华军.江苏大学. 2008
[8]中国卤虫胚胎发育过程中V-ATPase基因的表达[D]. 孙文静.辽宁师范大学. 2007
本文编号：3532503
【文章来源】： 西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 东方粘虫研究概述
1.2 V-ATP酶结构研究进展
1.2.1 V1部分的亚基
1.2.2 V0部分的亚基
1.3 V-ATP酶生物学功能研究进展
1.4 本研究的目的及意义
1.5 本研究的设计思路
第二章 东方粘虫中肠vatpa cDNA的克隆
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 东方粘虫中肠总RNA的提取和检测
2.2.2 东方粘虫中肠vatpa中间片段PCR扩增和检测
2.2.3 东方粘虫中肠vatpa 3'RACE扩增与检测
2.2.4 东方粘虫中肠vatpa 5'RACE扩增与检测
2.2.5 东方粘虫中肠vatpa RACE序列验证
2.2.6 东方粘虫中肠vatpa cDNA全长拼接及分析
2.2.7 东方粘虫中肠vatpa系统进化树分析和氨基酸序列比对
第三章 东方粘虫V-ATP酶A、B亚基原核表达载体构建
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果与分析
3.2.1 PCR扩增东方粘虫vatpa和vatpb及鉴定
3.2.2 东方粘虫vatpa和vatpb的PCR产物回收
3.2.3 原核表达载体pET-22b(+)质粒的提取与双酶切检测
3.2.4 原核表达载体pET-22b(+)的回收
3.2.5 原核表达载体pET22b-vatpa及pET22b-vatpb的构建与鉴定
第四章 东方粘虫中肠vatpa和vatpb诱导表达及复性纯化
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 东方粘虫中肠vatpa和vatpb氨基酸序列预测目的蛋白的基本参数
4.2.2 重组pET22b-vatpa的诱导表达及SDS-PAGE检测分析
4.2.3 重组pET22b-vatpb的诱导表达及SDS-PAGE检测分析
4.2.4 重组pET22b-vatpa及pET22b-vatpb蛋白的复性及检测
4.2.5 重组pET22b-vatpa及pET22b-vatpb蛋白的Ni柱纯化及检测
第五章 结论
第六章 讨论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]陆地棉纤维中GhGMPase2基因克隆、序列分析及原核表达 [J]. 赛富涛,禄亚洲,王斐,钱雯婕,李鸿彬. 西北农业学报. 2013(12)
[2]大豆GmNAC8基因克隆与原核表达 [J]. 刘晓庆,徐照龙,许玲,黄益洪,何晓兰,张大勇,马鸿翔. 江苏农业学报. 2013(04)
[3]人膜蛋白CD81的原核表达与纯化 [J]. 朱海珍,雷少华,刘春艳,焦宇,于晓妍,高益敏. 湖南大学学报(自然科学版). 2012(08)
[4]新城疫病毒HN09-69株P基因的克隆、序列分析及表达 [J]. 陈礼朋,王忠田,岳旭龙,王泽仁,高文明,李双亮,张宇耕,崔保安,李新生. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2012(02)
[5]粘虫与防治 [J]. 姬宪明. 现代农业. 2011(06)
[6]棉花脱氢抗坏血酸还原酶基因的克隆、原核表达与纯化 [J]. 李学宁,杜军伟,李鸿彬. 石河子大学学报(自然科学版). 2010(05)
[7]包涵体蛋白复性的几种方法 [J]. 罗惠霞,李敏,王玉炯. 生物技术通报. 2007(05)
[8]东方粘虫的识别、预测与防治方法 [J]. 刘恩志. 安徽农学通报. 2004(03)
[9]V-ATPase:结构、功能及其在肿瘤细胞中的作用 [J]. 卢小东,覃文新,杨胜利. 生命科学. 2004(02)
[10]生物农药的作用、应用与功效(二)——植物和动物源农药 [J]. 高菊芳. 世界农药. 2001(02)
硕士论文
[1]中华蟾蜍与日本蟾蜍皮肤galectin-3 cDNA的克隆、序列分析及原核表达[D]. 徐跃.浙江农林大学. 2012
[2]亚洲玉米螟中肠Bt毒素结合位点及V-ATPase A亚基基因与抗性的关系研究[D]. 李宁.中国农业科学院. 2012
[3]茶树L组UDPG-糖基转移酶基因的克隆及原核表达[D]. 田艳维.安徽农业大学. 2012
[4]新疆红肉苹果PGIP基因的克隆及原核表达[D]. 孙华.山东农业大学. 2012
[5]斜纹夜蛾SL-1细胞色素C基因的克隆及其原核表达[D]. 张丹.华中师范大学. 2012
[6]人脂联素球状结构域（gAd）的原核表达、纯化及生物活性检测[D]. 黄敏.山西医科大学. 2010
[7]家蚕V-ATPase B亚基和6PGL基因的研究[D]. 杨华军.江苏大学. 2008
[8]中国卤虫胚胎发育过程中V-ATPase基因的表达[D]. 孙文静.辽宁师范大学. 2007
本文编号：3532503
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/nykj/3532503.html
