贝莱斯芽孢杆菌CC09防治小麦全蚀病菌侵染的机制

发布时间：2022-01-02 20:01

　　小麦全蚀病是由禾顶囊壳小麦变种（Gaeumannomyces graminis var.tritici,Ggt）引起的小麦重要根部病害之一,发病区的小麦产量会降低20%-50%。在目前尚无有效抗病品种、轮作措施难以落实以及化学农药使用存在安全性风险的现状下,生防菌剂的研发和应用被寄予厚望。现已证明芽孢杆菌（Bacillus spp.）、荧光假单胞菌（Psdeuomnoda fluorescens）等生防菌对小麦全蚀病有较好的防治效果。然而,由于荧光假单胞菌的定殖能力受环境影响较大,且在土壤中难以维持较高的种群密度,严重影响了其防病效果的持续性。近年来,越来越多的研究证明,茅孢杆菌较荧光假单胞菌在防治小麦全蚀病方面具有更强的优势。特别是贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,不仅可以产生多种抗菌物质,而且还可以产生芽孢,具有抗逆性强的特点,是防治小麦全蚀病的理想生防菌。本论文拟以实验室拥有的一株从樟树叶片中分离获得的内生生防菌——贝莱斯茅孢杆菌CC09菌株（简称:Bv）为材料,采用DNA重组、组织学、转录组学、蛋白质组学、生物化学等技术,研究该菌在小麦植株中的定殖、传导... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１．植物ＰＴ丨的信号传导机制（Ｂｉｇｅａｒｄ?ｅｔａｌ．?２０１５）??为了获取植物细胞内的更多营养物质，实现在宿主的侵染、扩展，势必要??克服植物的ＰＴ丨防御统

南京大学博士学位论文??中起到枳极的作用（ＳｃｈｉｅｂｅｒａｎｄＣｈａｎｄｅ丨２０１４）。??证据证实：病原菌的侵染可以诱导破坏植物体内ＲＯＳ的积累，产生氧化迸发的现象，进而抑制病ｒａｎｄＣｈａｎｄｅｌ２０１４）。然而，有证据表明，病原制宿主的ＲＯＳ反应。例如，Ｈｅｍｅｔｓｂｅｒｇｅｒ?ｅｔ?ａｌ．?（粉菌（ｗａｙｔｆｏ）的Ｐｅｐ丨缺失突变体虽然但该病原菌侵染入宿主表皮后，其菌丝会停止进对该现象作了深入研究，发现：玉米黑粉菌Ｐｅｐｌ量的过氧化氢积累，并且编码过氧化物酶的基因Ｐｅｔｓｂｅｒｇｅｒ?ｅｔａｌ＿?２０丨２）。然而，Ｐｅｐｌ效应因子可以而阻碍了植物ＲＯＳ的产生，进而抑制了植物防御进一步的实现侵染植物组织（Ｈｅｍｅｔｓｂｅｒｇｅｒ?ｅｔ?ａｌ．?２Ｏｘｉｄａｓｅｓ?Ｍｌｔｏｃｈｏｎｄｆｉａ??

（３）电击完成后，立即向电转杯中加入ｌｍＬ的ＲＭ液体培养基，并将移至无菌的１．５ｍＬ离心管中。３７°Ｃ、２５０ｒｐｍ摇床震荡培养４ｈ。??２．２．３?ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ表达载体的构建??（１）采用ＰＣＲ扩增方法，从质粒ｐＧＦＰ４４１２中获得ＧＦＰ编码基因ＧＦＰｍｕｔ大小７１７匕卩。正向引物为：５’－八丁０八０丁八八八００八０八八０八八（：丁１＇丁丁（：－３’；反物为：５’－ＴＡＡＴＴＴＧＴＡＴＡＧＴＴＣＡＴＣＣＡＴＧＣＣ－３’。ＰＣＲ?的扩增条件参照?２ＸＭａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ产品说明书进行。??（２）利用Ｘｂａｌ和Ｈｉｎｄ?ＩＩＩ酶处理和电泳纯化，使质粒ｐＨＴ３１５线性化（６ｂｐ），获得用于基因克隆的质粒载体。质粒双酶切的体系为２０ｐＬ，包ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ?质粒?１４?（ｉＬ，Ｘｂａｌ?酶?２?｜ｉＬ，?Ｈｉｎｄｌｌｌ?酶?２?ｊａＬ，Ｔｅｒｍ。ｌＯＸＴａＢｕｆｆｅｒ?２?｜ｊＬ，置于３７°Ｃ的恒温培养箱中，酶切１６?ｈ。??（３）利用Ｔ４连接酶，将ＧＦＰｍｕｔ３ａ基因与线性化的ｐＨＴ３１５载体连接（７２ｂｐ），经电泳纯化，获得含ＧＦＰｍｕｔ３ａ基因的表达质粒ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ。??（４）将ｐＨＴ３１５－ＧＦＰｍｕｔ３ａ转化至ＴｒａｎｓｌＯ大肠杆菌感受态细胞中，获化子，用于该质粒的大量制备。??ｌ：ｃｏＲｌ?（５７？）??ＳｄＫｌ?（ＳＭ）??

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本文编号：3564801