野油菜黄单胞菌效应蛋白XopXccN抑制植物先天免疫反应机理的研究

发布时间：2022-02-14 22:09

　　野油菜黄单胞菌（Xcc, Xanthomonas campestris pv campestris）通过Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白到植物体内来完成其在植物体内的寄生。XopXccN是野油菜黄单胞菌Xcc8004的一个效应蛋白,先前的研究表明,XopXccN对于Xcc8004在寄主萝卜上的完整毒性是必须的,并且XopXccN可以干扰植物的光合系统,降低Xcc8004在侵染过程中寄主体内的活性氧产生和胼胝体沉积,然而,XopXccN在寄主体内具体的作用机理和毒性靶标还不清楚。本论文利用Xcc8004-拟南芥互作的模式系统,通过将XopXccN在细菌Xcc8004里做基因敲除,接种发现XopXccN对于Xcc8004在拟南芥的叶肉细胞内的完整毒性是必须的。进一步研究证实,XopXccN可以抑制鞭毛蛋白诱导的MAPK（Mitogen-activated protein kinase）激酶活性,并且可以抑制AtMEKK1和MKK5激活的MAPKs激酶活性,这表明XopXccN是通过影响寄主的MAPKs激酶通路来影响植物先天免疫反应的。通过免疫共沉淀试验,XopXccN可以与MKK5发生相互作用。荧... 

【文章来源】：海南大学海南省211工程院校

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
目录
1 前言
    1.1 概述
    1.2 植物的先天免疫反应
        1.2.1 PAMPs诱导的植物先天免疫反应
        1.2.2 效应子诱导的植物先天免疫反应
    1.3 黄单胞菌的Ⅲ型分泌系统及效应子
        1.3.1 黄单胞菌Ⅲ型分泌系统
        1.3.2 野油菜黄单胞菌及其效应因子
    1.4 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 植物品种
        2.1.3 抗生素
        2.1.4 质粒载体
        2.1.5 培养基
        2.1.6 酶和试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒的小量制备
        2.2.2 大量提取质粒
        2.2.3 野油菜黄单胞菌基因组DNA的快速提取
        2.2.4 野油菜黄单胞菌基因组DNA的大量提取
        2.2.5 野油菜黄单胞菌Xcc 8004感受态细胞的制备
        2.2.6 野油菜黄单胞菌Xcc 8004感受态细胞的电击转化（采用BIO-RAD公司的Pluse Controller 仪）
        2.2.7 大肠杆菌DH5 α感受态细胞的制备
        2.2.8 大肠杆菌E)H5a感受态细胞的电击转化（采用BIO-RAD公司Pluse Controller仪）
        2.2.9 拟南芥基因组DNA的提取
        2.2.10 原生质体的转化和蛋白提取
        2.2.11 Western杂交
        2.2.12 供试植物及菌株的培养条件
        2.2.13 植物接种方法
        2.2.14 荧光素酶双报告系统分析
        2.2.15 MAPK激酶活性分析
        2.2.16 In-ge1激酶活性分析
3 结果与分析
    3.1 在黄单胞菌Xcc8004里对基因XopXccN进行基因敲除
    3.2 XopXccN对于Xcc 8004在拟南芥上的完整毒性是必须的
    3.3 XopXccN可以抑制鞭毛蛋白诱导的MAPK激酶活性
    3.4 XopXccN可以抑制△MEKK1激活的MPK6和MPK3活性
    3.5 XopXccN对MAPK激酶活性的抑制发生在AtMKK5的下游
    3.6 XopXccN可以与MKK5在原生质体内发生相互作用
    3.7 XopXccN可以抑制鞭毛蛋白诱导的标志基因FRK1表达，并且这种抑制依赖于XopXccN全长蛋白
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3625355