Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶在舞毒蛾发育过程中的功能研究
发布时间：2022-11-06 13:47
几丁质由N-乙酰-D葡萄糖胺通过B-1,4-糖苷键聚合而成的直链多糖,是自然界一种重要的生物聚合物。它广泛存在于真菌、藻类、线虫、甲壳类动物及昆虫体内。在昆虫体内,几丁质是表皮和围食膜的关键组成部分。昆虫几丁质酶是一类由单基因编码的水解几丁质中的p-1,4-糖苷键的糖苷水解酶,属于糖苷水解酶18家族,在昆虫的消化、蜕皮、变态及侵染等生理过程中发挥着非常重要的作用。昆虫体内包含多个几丁质酶的编码基因,它们的结构域组成、生化性质和生理功能存在一定差异。目前,鉴于其能够降解几丁质的特性,昆虫几丁质酶已经被应用于病虫害防治和疾病控制等方面。本研究建立了舞毒蛾饲养过程中从卵的孵化、幼虫的发育、蛹的形成到成虫的生长及传代的完整循环周期。随后,对使用人工饲料饲喂的舞毒蛾幼虫的各个龄期的发育天数进行了统计,获得了舞毒蛾各龄期幼虫发育历期,为后续研究Ⅰ型几丁质酶基因（LdCht5）和Ⅱ型几丁质酶基因（dCht10）在舞毒蛾幼虫体内的龄期表达模式提供了依据。本研究克隆得到舞毒蛾LdCht10基因的关键序列2057bp,编码685个氨基酸,其中包括一个完整的催化区和几丁质结合区序列。另外,克隆获得了内参基因...
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1.1 舞毒蛾概述
1.1.1 舞毒蛾分布、习性及特征
1.1.2 舞毒蛾的治理
1.2 昆虫几丁质和几丁质酶
1.2.1 昆虫几丁质
1.2.2 昆虫几丁质酶
1.2.3 昆虫几丁质酶的应用
1.3 RNA干扰及其在昆虫功能基因研究中的应用
1.4 本论文的研究目的和意义
1.5 本研究课题的来源及主要研究内容
第二章 舞毒蛾的人工饲养及发育龄期统计
2.1 试虫来源
2.2 舞毒蛾的饲养
2.3 舞毒蛾幼虫各龄期的发育天数统计
2.4 结果
2.4.1 舞毒蛾幼虫各个龄期的形态特征
2.4.2 舞毒蛾幼虫各龄期发育天数
2.5 讨论
第三章 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶关键序列的克隆和生物信息学分析及内参基因的克隆
3.1 实验材料
3.1.1 实验昆虫
3.1.2 实验试剂及试剂盒
3.1.3 仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶基因关键序列的获取
3.2.2 舞毒蛾内参基因18S rRNA和β-actin的克隆
3.3 结果与分析
3.3.1 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶基因关键序列的拼接与及生物信息学分析
3.3.2 舞毒蛾18S rRNA的克隆与序列分析
3.3.3 舞毒蛾内参基因β-actin的克隆
3.4 讨论
第四章 舞毒蛾Ⅰ和Ⅱ型几丁质酶基因的时空表达
4.1 实验材料
4.1.1 实验试虫
4.1.2 实验试剂及仪器
4.2 实验方法
4.2.1 不同龄期舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的表达
4.2.2 不同组织舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的表达
4.3 结果与分析
4.3.1 不同龄期舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的表达分析
4.3.2 舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的不同组织部位表达分析
4.4 讨论
第五章 舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的功能分析
5.1 材料与试剂
5.1.1 试验昆虫
5.1.2 试剂与仪器
5.2 实验方法
5.2.1 dsRNA的体外合成
5.2.2 dsRNA的注射与观察
5.2.3 RNAi结果观察
5.3 结果与分析
5.3.1 舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶基因的功能分析
5.3.2 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶基因的功能分析
5.4 讨论
第六章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同人工饲料对舞毒蛾幼虫生长发育的影响[J]. 梁洪柱,陈倩,田会鹏,梁晓梅. 中国森林病虫. 2013(06)
[2]昆虫的RNA干扰[J]. 杨广,尤民生,赵伊英,刘春辉. 昆虫学报. 2009(10)
[3]昆虫RNAi技术及其应用[J]. 何正波,陈斌,冯国忠. 昆虫知识. 2009(04)
[4]舞毒蛾的发生与防治技术[J]. 王清树,慈维华. 现代化农业. 2007(07)
[5]人工饲料饲养舞毒蛾的试验[J]. 王志英,王秀国,王丽君. 东北林业大学学报. 2004(06)
[6]不同食料植物对舞毒蛾生长发育的影响[J]. 石娟,王月,徐洪儒,闫国增,梁洪柱,张秋霜. 北京林业大学学报. 2003(05)
[7]舞毒蛾生物防治研究进展[J]. 胡春祥. 东北林业大学学报. 2002(04)
[8]几丁质的研究与进展[J]. 陈西广,刘万顺,刘晨光. 生物工程进展. 1997(03)
[9]化学药剂防治舞毒蛾幼虫试验研究[J]. 赵方桂，刘元铅，李涛，席永华，阂祥宏. 山东林业科技. 1994(05)
[10]中国舞毒蛾天敌昆虫名录[J]. 严静君，姚德富，刘后平，李广武. 林业科技通讯. 1994(05)
硕士论文
[1]舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶基因的克隆、序列分析及真核表达[D]. 宋志芳.太原理工大学 2013
[2]亚洲玉米螟几丁质水解酶的克隆表达与生化性质表征[D]. 吴青悦.大连理工大学 2012
[3]飞蝗几丁质酶基因的功能研究[D]. 李大琪.山西大学 2011
本文编号：3703607
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
1.1 舞毒蛾概述
1.1.1 舞毒蛾分布、习性及特征
1.1.2 舞毒蛾的治理
1.2 昆虫几丁质和几丁质酶
1.2.1 昆虫几丁质
1.2.2 昆虫几丁质酶
1.2.3 昆虫几丁质酶的应用
1.3 RNA干扰及其在昆虫功能基因研究中的应用
1.4 本论文的研究目的和意义
1.5 本研究课题的来源及主要研究内容
第二章 舞毒蛾的人工饲养及发育龄期统计
2.1 试虫来源
2.2 舞毒蛾的饲养
2.3 舞毒蛾幼虫各龄期的发育天数统计
2.4 结果
2.4.1 舞毒蛾幼虫各个龄期的形态特征
2.4.2 舞毒蛾幼虫各龄期发育天数
2.5 讨论
第三章 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶关键序列的克隆和生物信息学分析及内参基因的克隆
3.1 实验材料
3.1.1 实验昆虫
3.1.2 实验试剂及试剂盒
3.1.3 仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶基因关键序列的获取
3.2.2 舞毒蛾内参基因18S rRNA和β-actin的克隆
3.3 结果与分析
3.3.1 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶基因关键序列的拼接与及生物信息学分析
3.3.2 舞毒蛾18S rRNA的克隆与序列分析
3.3.3 舞毒蛾内参基因β-actin的克隆
3.4 讨论
第四章 舞毒蛾Ⅰ和Ⅱ型几丁质酶基因的时空表达
4.1 实验材料
4.1.1 实验试虫
4.1.2 实验试剂及仪器
4.2 实验方法
4.2.1 不同龄期舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的表达
4.2.2 不同组织舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的表达
4.3 结果与分析
4.3.1 不同龄期舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的表达分析
4.3.2 舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的不同组织部位表达分析
4.4 讨论
第五章 舞毒蛾Ⅰ型和Ⅱ型几丁质酶基因的功能分析
5.1 材料与试剂
5.1.1 试验昆虫
5.1.2 试剂与仪器
5.2 实验方法
5.2.1 dsRNA的体外合成
5.2.2 dsRNA的注射与观察
5.2.3 RNAi结果观察
5.3 结果与分析
5.3.1 舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶基因的功能分析
5.3.2 舞毒蛾Ⅱ型几丁质酶基因的功能分析
5.4 讨论
第六章 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同人工饲料对舞毒蛾幼虫生长发育的影响[J]. 梁洪柱,陈倩,田会鹏,梁晓梅. 中国森林病虫. 2013(06)
[2]昆虫的RNA干扰[J]. 杨广,尤民生,赵伊英,刘春辉. 昆虫学报. 2009(10)
[3]昆虫RNAi技术及其应用[J]. 何正波,陈斌,冯国忠. 昆虫知识. 2009(04)
[4]舞毒蛾的发生与防治技术[J]. 王清树,慈维华. 现代化农业. 2007(07)
[5]人工饲料饲养舞毒蛾的试验[J]. 王志英,王秀国,王丽君. 东北林业大学学报. 2004(06)
[6]不同食料植物对舞毒蛾生长发育的影响[J]. 石娟,王月,徐洪儒,闫国增,梁洪柱,张秋霜. 北京林业大学学报. 2003(05)
[7]舞毒蛾生物防治研究进展[J]. 胡春祥. 东北林业大学学报. 2002(04)
[8]几丁质的研究与进展[J]. 陈西广,刘万顺,刘晨光. 生物工程进展. 1997(03)
[9]化学药剂防治舞毒蛾幼虫试验研究[J]. 赵方桂，刘元铅，李涛，席永华，阂祥宏. 山东林业科技. 1994(05)
[10]中国舞毒蛾天敌昆虫名录[J]. 严静君，姚德富，刘后平，李广武. 林业科技通讯. 1994(05)
硕士论文
[1]舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶基因的克隆、序列分析及真核表达[D]. 宋志芳.太原理工大学 2013
[2]亚洲玉米螟几丁质水解酶的克隆表达与生化性质表征[D]. 吴青悦.大连理工大学 2012
[3]飞蝗几丁质酶基因的功能研究[D]. 李大琪.山西大学 2011
本文编号：3703607
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/nykj/3703607.html
