烟粉虱NADPH-细胞色素P450还原酶与NADH-细胞色素b5还原酶基因的克隆及表达量分析

发布时间：2022-12-17 09:25

　　烟粉虱Bemisia tabaci （Gennadius）属同翅目（半翅目）,粉虱科,粉虱亚科,小粉虱属,是一种危害多种农业系统的农业害虫。自二十世纪八十年代以来,大量杀虫剂用于防治烟粉虱,频繁且不合理的使用杀虫剂,导致该害虫对多种杀虫剂产生抗性。烟粉虱对杀虫剂抗性产生机制主要是增强解毒酶活性和靶标不敏感性（target insensitivity）。细胞色素P450系统在烟粉虱对相关杀虫剂抗性中起重要作用。 NADPH-细胞色素P450还原酶（EC1.6.2.4, NADPH-cytochrome P450reduetase, CPR）和NADH-细胞色素b5还原酶（EC.1.6.6.2, NADH-cytochrome b5reduetase, CBR）都是细胞色素P450氧化还原酶系的重要组成部分,在细胞色素P450介导的氧化还原反应中起着电子传递链的作用。本文采用反转录库策略得到烟粉虱CPR的全长cDNA序列与RACE策略得到CBR的全长cDNA序列,探索了CPR和CBR基因在烟粉虱不同身体部位、不同发育阶段及不同抗性品系的表达量差异,以期为深入研究细胞色素P450酶系在... 

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略表
目录
第一章 文献综述
    1.1 细胞色素P450
    1.2 NADPH—细胞色素P450还原酶
    1.3 NADH-细胞色素b5还原酶
    1.4 昆虫P450基因(蛋白)技术研究进展
    1.5 本实验研究的目的和意义
第二章 烟粉虱CPR与CBR基因的克隆
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试昆虫、寄主植物和养虫笼
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 总RNA的提取及检测
        2.1.4 第一条cDNA链的合成
        2.1.5 烟粉虱CPR与CBR cDNA片段扩增
        2.1.6 CPR基因全长CDS克隆
        2.1.7 CBR基因RACE及全长CDS克隆
    2.2 结果与分析
第三章 烟粉虱CPR与CBR基因生物信息学分析
    3.1 序列分析
    3.2 系统发育树的构建
    3.3 CPR 3D结构模型的构建
    3.4 CBR 3D结构模型的构建
第四章 CPR与CBR基因在不同发育阶段及不同组织部位的表达量差异分析
    4.1 供试昆虫
    4.2 试验方法
        4.2.1 RNA的提取
        4.2.2 cDNA第一链的合成
        4.2.3 引物设计
        4.2.4 实时荧光定量PCR反应条件
        4.2.5 引物扩增效率及扩增产物的熔解曲线
    4.3 结果分析
    4.4 小结与讨论
第五章 不同药剂处理CPR与CBR基因的表达量差异
    5.1 供试烟粉虱
    5.2 试验方法
        5.2.1 RNA的提取
        5.2.2 cDNA第一链的合成
        5.2.3 引物设计
        5.2.4 实时荧光定量PCR的反应条件
    5.3 结果分析
    5.4 小结与讨论
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]微粒体多功能氧化酶系与棉铃虫对氰戊菊酯抗药性的关系[J]. 邱立红,张文吉.  昆虫学报. 2001(04)
[2]棉铃虫不同发育阶段微粒体P450酶系组成和活性的比较[J]. 邱星辉,李薇,冷欣夫.  昆虫学报. 2001(02)
[3]NADH-细胞色素b5还原酶与散发性甲状腺肿的关系[J]. 黄国良,林芬,高妍.  中国地方病学杂志. 2000(04)
[4]棉铃虫幼虫加单氧酶活性的组织分布[J]. 邱星辉,冷欣夫.  生态学报. 2000(02)
[5]棉铃虫微粒体多功能氧化酶系组分含量及酶活性在不同生长发育阶段的变化规律研究[J]. 邱立红,张文吉,李晓薇.  农药学学报. 1999(01)



本文编号：3719671