赤拟谷盗蛛毒素受体Latrophilin功能及信号传导分析
发布时间：2023-12-02 14:16
G蛋白偶联受体(GPCR)Latrophilin(LPH)不仅涉及人类与哺乳动物的多动症、精神分裂症及成瘾等精神疾病的发生,还涉及到对外源蛛毒素的信号传递及多种药物的敏感性。目前关于LPH受体在昆虫中的功能和信号传导机制尚不清楚。本研究首先在21种动物中对LPH进行了系统进化分析,结果显示,lph是由一个共同祖先基因衍化而来,但是lph分别在脊椎动物、头索动物、尾索动物和昆虫中发生了独立的进化。lph基因在脊椎动物中发生了复制,产生了 3个拷贝(lph-1,lph-2和lph-3);鸟类、尾索动物、头索动物中也发生了基因复制事件只存在lph-2和lph-3。线虫中有两个拷贝,分别对应于脊椎动物lph-1和lph-2;然而,lph基因在昆虫只有一个拷贝。这些物种的lph虽然起源与一个共同祖先基因,但是却发生了复杂的分化,暗示其在这些物种中可能发生了功能分化。为了研究LPH在赤拟谷盗生长发育中的调控作用,我们克隆了其Tclph基因,发现该基因在赤拟谷盗中存在3种选择性拼接形式Tclpha,Tclphb和Tclphc。为了进一步研究赤拟谷盗中这3种剪接本的作用,我们分别敲减了三种剪接本特异区...
【文章页数】：124 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 昆虫G蛋白偶联受体研究进展
1.2 Latrophilin的研究现状
1.2.1 LPH的发现
1.2.2 LPH的结构
1.2.3 LPH表达模式的研究
1.2.4 LPH配体的研究进展
1.2.5 LPH生物学功能
1.3 转录组学在昆虫研究中的应用
1.3.1 转录组学的概念
1.3.2 RNA-seq技术的原理及技术流程
1.3.3 转录组学的优势
1.3.4 RNA-seq的应用
1.4 本研究的目的和意义
第2章 赤拟谷盗蛛毒素受体LPH的鉴定及功能分析
2.1 实验材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.1.4 LPH的鉴定及进化分析
2.1.5 引物设计
2.1.6 提取总RNA
2.1.7 逆转录合成cDNA
2.1.8 lph全长cDNA克隆
2.1.9 lph不同发育时期、组织表达模式分析
2.1.10 dsRNA合成
2.1.11 dsRNA的注射
2.1.12 赤拟谷盗产卵量和孵化率统计
2.1.13 赤拟谷盗成虫组织的解剖和拍照
2.1.14 lph下游的基因检测
2.1.15 数据处理
2.3 结果与分析
2.3.1 赤拟谷盗LPH的鉴定
2.3.2 LPH系统发育及同线性分析
2.3.3 赤拟谷盗lph基因的时空表达模式
2.3.4 RNAi表型分析
2.3.5 赤拟谷盗lph信号转导通路的分析
2.4 讨论
第3章 lph通过ACh通路调控赤拟谷盗药物敏感性
3.1 引言
3.2 实验材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验药品与试剂
3.2.4 总RNA提取
3.2.5 逆转录合成cDNA
3.2.6 组织表达模式分析
3.2.7 dsRNA合成
3.2.8 dsRNA的注射
3.2.9 药物敏感性检测
3.2.10 ChAT、AChE和ACh含量检测
3.2.11 数据处理
3.3 结果与分析
3.3.1 赤拟谷盗lph基因的幼虫组织表达模式
3.3.2 RNA干扰lph增加赤拟谷盗对杀虫剂的敏感性
3.3.3 杀虫剂诱导lph基因表达
3.3.4 敲减lph分别抑制和促进chat及ace-1表达
3.3.5 干扰lph分别降低和增加ChAT及AChE的酶活水平
3.3.6 敲减lph降低ACh含量
3.4 讨论
第4章 赤拟谷盗lph基因调控信号通路探究
4.1 引言
4.2 实验材料与方法
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验仪器
4.2.3 实验试剂
4.2.4 RNAi
4.2.5 总RNA提取和Illumina测序
4.2.6 数据质控分析
4.2.7 Reads在参考基因组和注释基因上的分布分析
4.2.8 基因表达量分析和差异基因表达分析
4.2.9 GO (Gene Ontology)功能显著性富集分析
4.2.10 Pathway显著性富集分析
4.2.11 qRT-PCR验证测序数据
4.3 结果与分析
4.3.1 Illumina测序结果比对到赤拟谷盗基因组
4.3.2 基因表达量分析
4.3.3 注释所有检测到的基因
4.3.4 DEGs的鉴定
4.3.5 DEGs的功能分析
4.4 讨论
第5章 lph调控est4和est6参与赤拟谷盗药物敏感性和生殖过程
5.1 引言
5.2 实验材料与方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验仪器
5.2.3 实验药品与试剂
5.2.4 总RNA提取
5.2.5 逆转录合成cDNA
5.2.6 ests不同发育时期、组织表达模式分析
5.2.7 dsRNA合成
5.2.8 dsRNA的注射
5.2.9 赤拟谷盗产卵量和孵化率统计
5.2.10 药物敏感性检测
5.2.11 赤拟谷盗成虫组织的解剖和拍照
5.2.12 数据处理
5.3 结果与分析
5.3.1 赤拟谷盗lph下游基因est4和est6的时空表达模式
5.3.2 杀虫剂处理对诱导est4和est6表达
5.3.3 敲减est4和est6增加杀虫剂敏感性
5.3.4 杀虫剂处理dslph昆虫分别促进和抑制est4和est6的表达
5.3.5 lph分别正调控和负调控est4和est6的表达
5.3.6 RNA干扰est6和lph基因降低雌虫的产卵量和卵的孵化率
5.3.7 敲低est6和lph基因影响卵巢发育和卵的尺寸
5.4 讨论
第6章 总结
6.1 研究主要结论
6.2 论文主要创新点
6.3 论文不足之处
参考文献
在读期间已/待发表的学术论文及研究成果
致谢
本文编号：3869838
【文章页数】：124 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 昆虫G蛋白偶联受体研究进展
1.2 Latrophilin的研究现状
1.2.1 LPH的发现
1.2.2 LPH的结构
1.2.3 LPH表达模式的研究
1.2.4 LPH配体的研究进展
1.2.5 LPH生物学功能
1.3 转录组学在昆虫研究中的应用
1.3.1 转录组学的概念
1.3.2 RNA-seq技术的原理及技术流程
1.3.3 转录组学的优势
1.3.4 RNA-seq的应用
1.4 本研究的目的和意义
第2章 赤拟谷盗蛛毒素受体LPH的鉴定及功能分析
2.1 实验材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.1.3 实验试剂
2.1.4 LPH的鉴定及进化分析
2.1.5 引物设计
2.1.6 提取总RNA
2.1.7 逆转录合成cDNA
2.1.8 lph全长cDNA克隆
2.1.9 lph不同发育时期、组织表达模式分析
2.1.10 dsRNA合成
2.1.11 dsRNA的注射
2.1.12 赤拟谷盗产卵量和孵化率统计
2.1.13 赤拟谷盗成虫组织的解剖和拍照
2.1.14 lph下游的基因检测
2.1.15 数据处理
2.3 结果与分析
2.3.1 赤拟谷盗LPH的鉴定
2.3.2 LPH系统发育及同线性分析
2.3.3 赤拟谷盗lph基因的时空表达模式
2.3.4 RNAi表型分析
2.3.5 赤拟谷盗lph信号转导通路的分析
2.4 讨论
第3章 lph通过ACh通路调控赤拟谷盗药物敏感性
3.1 引言
3.2 实验材料与方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 实验仪器
3.2.3 实验药品与试剂
3.2.4 总RNA提取
3.2.5 逆转录合成cDNA
3.2.6 组织表达模式分析
3.2.7 dsRNA合成
3.2.8 dsRNA的注射
3.2.9 药物敏感性检测
3.2.10 ChAT、AChE和ACh含量检测
3.2.11 数据处理
3.3 结果与分析
3.3.1 赤拟谷盗lph基因的幼虫组织表达模式
3.3.2 RNA干扰lph增加赤拟谷盗对杀虫剂的敏感性
3.3.3 杀虫剂诱导lph基因表达
3.3.4 敲减lph分别抑制和促进chat及ace-1表达
3.3.5 干扰lph分别降低和增加ChAT及AChE的酶活水平
3.3.6 敲减lph降低ACh含量
3.4 讨论
第4章 赤拟谷盗lph基因调控信号通路探究
4.1 引言
4.2 实验材料与方法
4.2.1 实验材料
4.2.2 实验仪器
4.2.3 实验试剂
4.2.4 RNAi
4.2.5 总RNA提取和Illumina测序
4.2.6 数据质控分析
4.2.7 Reads在参考基因组和注释基因上的分布分析
4.2.8 基因表达量分析和差异基因表达分析
4.2.9 GO (Gene Ontology)功能显著性富集分析
4.2.10 Pathway显著性富集分析
4.2.11 qRT-PCR验证测序数据
4.3 结果与分析
4.3.1 Illumina测序结果比对到赤拟谷盗基因组
4.3.2 基因表达量分析
4.3.3 注释所有检测到的基因
4.3.4 DEGs的鉴定
4.3.5 DEGs的功能分析
4.4 讨论
第5章 lph调控est4和est6参与赤拟谷盗药物敏感性和生殖过程
5.1 引言
5.2 实验材料与方法
5.2.1 实验材料
5.2.2 实验仪器
5.2.3 实验药品与试剂
5.2.4 总RNA提取
5.2.5 逆转录合成cDNA
5.2.6 ests不同发育时期、组织表达模式分析
5.2.7 dsRNA合成
5.2.8 dsRNA的注射
5.2.9 赤拟谷盗产卵量和孵化率统计
5.2.10 药物敏感性检测
5.2.11 赤拟谷盗成虫组织的解剖和拍照
5.2.12 数据处理
5.3 结果与分析
5.3.1 赤拟谷盗lph下游基因est4和est6的时空表达模式
5.3.2 杀虫剂处理对诱导est4和est6表达
5.3.3 敲减est4和est6增加杀虫剂敏感性
5.3.4 杀虫剂处理dslph昆虫分别促进和抑制est4和est6的表达
5.3.5 lph分别正调控和负调控est4和est6的表达
5.3.6 RNA干扰est6和lph基因降低雌虫的产卵量和卵的孵化率
5.3.7 敲低est6和lph基因影响卵巢发育和卵的尺寸
5.4 讨论
第6章 总结
6.1 研究主要结论
6.2 论文主要创新点
6.3 论文不足之处
参考文献
在读期间已/待发表的学术论文及研究成果
致谢
本文编号：3869838
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