基于形态与分子技术相结合的叶螨鉴定法研究

发布时间：2024-02-24 10:40

　　叶螨属于节肢动物门(Arthropoda)、蛛形纲(Arachinida)、蜱螨亚纲(Acari)、真螨总目(Acariformes)、绒螨目(Trombidiformes)、前气门亚目(Prostigmata)、异气门总股(Eleutherengonides)、叶螨科(Tetranychidae),是一种危害蔬菜、果树、豆科植物和观赏性植物的重要农业害虫。在实行植物检疫过程中,由于不同种类叶螨的形态特征相似度高,因而往往找不到好的鉴别特征。一般来说,叶螨属的叶螨主要是通过雄虫外生殖器阳具端锤的性状来进行鉴定,但是形态学鉴定局限于特定的发育阶段,且对于亲缘关系较近的物种或隐存种区分困难。例如二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch)和朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus Boisduval)具有非常相似的形态特征,在传统叶螨分类研究中常引起分类学家的意见分歧。为了解决形态学鉴定问题,越来越多的分子标记技术被应用于蜱螨鉴定。其中限制性片段长度多态性聚合酶链式反应技术(PCR-RFLP)被认为是有效区分叶螨属种类的鉴定手段。基于DNA序列差异的叶螨鉴...

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 叶螨的经济意义与为害情况
        1.1 叶螨的分类地位
        1.2 叶螨的生物学特性
            1.2.1 繁殖方式
            1.2.2 个体发育和变态
            1.2.3 食性
            1.2.4 滞育
        1.3 农业螨类对作物的危害
            1.3.1 农业螨类危害对植物生理的影响
            1.3.2 危害禾谷类粮食作物
            1.3.3 危害经济作物
            1.3.4 危害果树和蔬菜
        1.4 叶螨的分布
    2 形态学技术在蜱螨鉴定中的应用
        2.1 叶螨形态特征
        2.2 朱砂叶螨与二斑叶螨分类地位研究
        2.3 形态学在蜱螨鉴定中的作用
            2.3.1 形态学在蜱螨鉴定中的优点
            2.3.2 形态学在蜱螨鉴定中的不足
    3 分子生物学技术在鉴定中的应用
        3.1 蛋白质标记技术
        3.2 DNA分子标记技术
            3.2.1 限制性片段长度多态性
            3.2.2 随机扩增DNA多态性
            3.2.3 扩增片段长度多态性
            3.2.4 DNA序列分析
        3.3 基因组DNA多态性分析在蜱螨鉴定中的应用
            3.3.1 线粒体DNA多态性在蜱螨鉴定研究中的应用
            3.3.2 核糖体DNA多态性在蜱螨鉴定研究中的应用
    4 DNA条形码
        4.1 DNA条形码的应用
        4.2 DNA条形码的优点
        4.3 DNA条形码的局限性
第二章 叶螨的形态学鉴定
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 供试材料
        1.2 标本制作
        1.3 形态学鉴定方法
    2 结果
        2.1 形态学鉴定结果
        2.2 样本所属种类鉴定结果
    3 讨论
第三章 基于ITS序列对叶螨的鉴定及系统发育分析
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 供试材料
        1.2 叶螨的形态学鉴定
        1.3 叶螨DNA的提取
        1.4 ITS序列的扩增和测定
        1.5 ITS序列比对及对应物种核实
        1.6 系统进化关系分析
    2 结果
        2.1 样本种类的形态学鉴定结果
        2.2 基于ITS序列的碱基差异及替换饱和性分析
        2.3 叶螨种间遗传距离分析
        2.4 ITS序列的分子系统学分析
    3 讨论
        3.1 ITS和COI基因序列在叶螨物种鉴定中的广泛适用性和局限
        3.2 二斑叶螨红色型与绿色型分类地位的探讨
第四章 叶螨的ITS-RFLP鉴定研究
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 供试材料
        1.2 叶螨DNA的提取
        1.3 ITS序列的扩增和检测
        1.4 RFLP鉴定方法
    2 结果
        2.1 RFLP技术鉴定结果
        2.2 样本所属种类鉴定结果
    3 讨论
第五章 中国常见叶螨ITS-RFLP快速鉴定方法
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 供试材料
        1.2 叶螨的形态学鉴定
        1.3 叶螨DNA的提取
        1.4 ITS序列的扩增和检测
        1.5 PCR产物纯化
        1.6 质粒载体的连接和转化反应
            1.6.1 连接反应
            1.6.2 转化反应
            1.6.3 细菌培养
        1.7 测序
        1.8 ITS序列分析
        1.9 限制性内切酶的选取及PCR-RFLP检测
    2 结果
        2.1 形态学鉴定结果
        2.2 基于ITS序列构建的系统发育树
        2.3 3 种限制性内切酶的筛选和ITS-RFLP酶切图谱的建立
    3 讨论
参考文献
学术论文发表情况
致谢



本文编号：3908870