丁香假单胞菌MB03转录调控因子InpR调控网络解析和分子机制研究

发布时间：2024-03-24 11:47

　　丁香假单胞菌是一种常见的植物病原菌,其拥有广泛的宿主,能够感染各种各样的植物。能够使植物叶片出现棕色斑点、芽变褐色、树干和树枝的腐烂、植株冻害以及果实的倒塌,其疫情爆发能够造成严重的经济损失。本研究的主要研究对象为本室自主分离的一株具有冰核活性的一株丁香假单胞菌MB03,探索该菌株中的一个GntR家族转录调控因子InpR对其体内基因的转录调控作用以及调控的分子机制。当中断了 InpR基因后,与野生菌株相比,生长明显变慢,表明InpR蛋白直接或间接调控MB03的生长代谢。从这一表型出发,以转录组数据为依据,筛选其中发生明显上下调的基因,设计相应的DNA探针进行体外EMSA实验。通过EMSA等实验验证了 InpR对基因VT47₁440(氨基酸通透酶)、VT47₂4100(酰基-CoA脱氢酶)VT47₁7390(富马酸水合酶)的直接调控作用。对上述三个基因进行RT-qPCR实验,结果发现在突变株MB487中三个基因的表达量菌出现了明显的下调作用,说明InpR正调控这些基因的表达。为了探究小分子物质对InpR调控的影响,从上述靶...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3.1.1InpR补偿质粒构建流程

华中农业大学2019级硕士研究生学位（毕业）论文与分析除后影响丁香假单胞菌MB03生长因回补菌株的构建研究中，对InpR基因进行的敲除（张中娜2014），回补的时候并回补。因此利用实验室改造的补偿质粒pMB693进行InpR的回补经证明能够在丁香假单胞菌中较好的....

图3.1.2补偿菌株构建

得到重组菌MB711，再进行PCR的验证是否转入的是所需的目标质粒，结果均符合预期（图3.1.2.E）。ABCDE图3.1.2补偿菌株构建Fig3.1.2Constructionofcomlimentstrain图A：M为5KDNAmaker，泳....

图3.1.3野生菌MB03、InpR敲除菌与回补菌株生长曲线

华中农业大学2019级硕士研究生学位（毕业）论文MB03、InpR敲除菌与回补菌株生长曲线测定一样，LB培养基，28℃培养条件下，同时测定野生曲线。在中断InpR后，野生菌株的生长明显变慢，，但是相对于突变株来说表型有了一定的恢复（图B03的生长有关，可能调控生长....

图3.3.13个片段结合序列的验证

S3-4：……GGCGGCTGGCCTGGACCAGGCCCA……S1-1S1-2S1-3S1-4S2-1S2-2S2-3S2-4

本文编号：3937396