小菜蛾对氟虫双酰胺抗性风险评估及Bi-PASA分子检测
发布时间：2024-07-01 20:32
小菜蛾(Plutella xylostella L.)是世界性十字花科蔬菜的重要害虫,也是抗药性产生和发展严重的害虫之一。由于其世代重叠严重,繁殖力强,加上一些地区田间不合理的用药,导致田间小菜蛾抗药性发展迅速且抗性背景复杂,这为该虫的化学防治造成了较大困难。氟虫双酰胺作为新型鱼尼丁受体激活类杀虫剂,对鳞翅目害虫高效,对哺乳动物低毒、安全,作用于昆虫后可使调控钙离子释放的鱼尼丁受体通道持续开放,导致细胞中钙离子浓度上升,持续的钙离子释放会引起虫体不断的收缩、呕吐、脱粪,进而停止进食,最终导致虫体死亡。随着氟虫双酰胺的应用,害虫对该药剂的抗药性问题也日益受到关注。为了了解小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展情况,本文通过室内抗性汰选及其生物适合度的研究,分析了小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险；同时以相对敏感品系、氟虫双酰胺抗性品系和田间抗性种群小菜蛾为材料,研究了抗性产生的可能分子机制及基因突变频率,旨在为该药剂的科学使用提供指导。研究结果如下： 1.采用点滴法,测定了小菜蛾3龄幼虫对氟虫双酰胺三个品系/种群的毒力,结果表明,氟虫双酰胺对相对敏感品系(S)小菜蛾的72h LD50为0.921μg/g...
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 鱼尼丁受体(RyR)及鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的研究进展
1.1.1 鱼尼丁受体的发展史
1.1.2 鱼尼丁受体的结构
1.1.3 鱼尼丁受体的类型
1.1.4 化合物对鱼尼丁受体功能的调节
1.1.5 作用于鱼尼丁受体杀虫剂的研究概况
1.1.5.1 氟虫双酰胺(flubendiamide)
1.1.5.2 氟虫双酰胺的理化性质
1.1.5.3 氟虫双酰胺的毒性
1.1.6 鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的作用机制
1.2 小菜蛾的生物学及其抗药性研究进展
1.2.1 小菜蛾的生物学及危害
1.2.2 小菜蛾的抗药性现状
1.2.3 小菜蛾的抗药性机理研究
1.3 鱼尼丁受体基因突变频率检测技术
1.3.1 Bi-PASA技术原理
1.3.2 Bi-PASA技术特点及应用
1.4 本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 供试材料
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 供试药剂及化学试剂
2.1.3 主要分子试剂
2.1.4 主要仪器
2.1.5 试剂及培养基的配制
2.2 试验方法
2.2.1 小菜蛾的饲养
2.2.2 氟虫双酰胺对小菜蛾的毒力测定及抗性选育
2.2.3 交互抗性的测定
2.2.4 构建种群生命表的方法
2.2.5 抗性现实遗传力(h2)估算与抗性风险评估
2.3 PCR及Bi-PASA等方法
2.3.1 小菜蛾RNA提取、逆转录及PCR扩增
2.3.1.1 小菜蛾RNA提取
2.3.1.2 小菜蛾总RNA的检测
2.3.1.2.1 小菜蛾总RNA纯度检测—分光光度法
2.3.1.2.2 小菜蛾总RNA完整性的鉴定—琼脂糖凝胶电泳
2.3.1.3 引物的设计
2.3.1.4 小菜蛾第一链cDNA合成
2.3.1.5 PCR扩增
2.3.1.6 产物纯化、链接转化与测序
2.3.1.6.1 产物的回收与纯化
2.3.1.6.2 载体连接
2.3.1.6.3 转化、扩大培养及测序
2.3.1.7 分析软件
2.3.2 小菜蛾基因突变频率的检测
2.3.2.1 Bi-PASA引物设计
2.3.2.2 小菜蛾基因组DNA提取
2.3.2.3 Bi-PASA的检测
2.3.3 不同品系小菜蛾对RyR的表达量
2.3.3.1 荧光定量PCR的引物设计
2.3.3.2 荧光定量PCR
3 结果与分析
3.1 氟虫双酰胺对三种小菜蛾品系/种群的毒力测定
3.2 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律及交互抗性
3.2.1 氟虫双酰胺对小菜蛾的抗性汰选
3.2.2 小菜蛾氟虫双酰胺抗性品系对其他药剂的交互抗性
3.3 小菜蛾氟虫双酰胺抗性品系的生物学特性
3.4 小菜蛾抗氟虫双酰胺的抗性现实遗传力和风险评估
3.4.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性现实遗传力
3.4.2 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险评估
3.5 小菜蛾鱼尼丁受体基因序列与基因突变频率检测
3.5.1 小菜蛾鱼尼丁受体C-末端的克隆及基因序列比对分析
3.5.2 小菜蛾RyR基因突变频率检测结果分析
3.6 RyR在不同品系小菜蛾中的表达量
3.6.1 小菜蛾总RNA质量检测(PAGE法)
3.6.2 小菜蛾总RNA纯度和浓度的检测
3.6.3 荧光定量PCR的特异性和重复性
3.6.4 扩增效率
3.6.5 不同品系小菜蛾RyR基因的表达量
4 讨论
4.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律
4.2 抗氟虫双酰胺小菜蛾品系的生物学特性
4.3 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险评估
4.4 RyR基因突变频率的检测
4.5 不同品系RyR基因表达量的检测
4.6 有待继续研究的问题
5 结论
5.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律及风险评估
5.2 抗氟虫双酰胺小菜蛾的生物适合度
5.3 抗氟虫双酰胺小菜蛾RyR的基因突变频率
5.4 不同品系RyR的基因表达量的差异
本文创新之处
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
本文编号：3999146
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 鱼尼丁受体(RyR)及鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的研究进展
1.1.1 鱼尼丁受体的发展史
1.1.2 鱼尼丁受体的结构
1.1.3 鱼尼丁受体的类型
1.1.4 化合物对鱼尼丁受体功能的调节
1.1.5 作用于鱼尼丁受体杀虫剂的研究概况
1.1.5.1 氟虫双酰胺(flubendiamide)
1.1.5.2 氟虫双酰胺的理化性质
1.1.5.3 氟虫双酰胺的毒性
1.1.6 鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的作用机制
1.2 小菜蛾的生物学及其抗药性研究进展
1.2.1 小菜蛾的生物学及危害
1.2.2 小菜蛾的抗药性现状
1.2.3 小菜蛾的抗药性机理研究
1.3 鱼尼丁受体基因突变频率检测技术
1.3.1 Bi-PASA技术原理
1.3.2 Bi-PASA技术特点及应用
1.4 本研究的目的及意义
2 材料与方法
2.1 供试材料
2.1.1 供试昆虫
2.1.2 供试药剂及化学试剂
2.1.3 主要分子试剂
2.1.4 主要仪器
2.1.5 试剂及培养基的配制
2.2 试验方法
2.2.1 小菜蛾的饲养
2.2.2 氟虫双酰胺对小菜蛾的毒力测定及抗性选育
2.2.3 交互抗性的测定
2.2.4 构建种群生命表的方法
2.2.5 抗性现实遗传力(h2)估算与抗性风险评估
2.3 PCR及Bi-PASA等方法
2.3.1 小菜蛾RNA提取、逆转录及PCR扩增
2.3.1.1 小菜蛾RNA提取
2.3.1.2 小菜蛾总RNA的检测
2.3.1.2.1 小菜蛾总RNA纯度检测—分光光度法
2.3.1.2.2 小菜蛾总RNA完整性的鉴定—琼脂糖凝胶电泳
2.3.1.3 引物的设计
2.3.1.4 小菜蛾第一链cDNA合成
2.3.1.5 PCR扩增
2.3.1.6 产物纯化、链接转化与测序
2.3.1.6.1 产物的回收与纯化
2.3.1.6.2 载体连接
2.3.1.6.3 转化、扩大培养及测序
2.3.1.7 分析软件
2.3.2 小菜蛾基因突变频率的检测
2.3.2.1 Bi-PASA引物设计
2.3.2.2 小菜蛾基因组DNA提取
2.3.2.3 Bi-PASA的检测
2.3.3 不同品系小菜蛾对RyR的表达量
2.3.3.1 荧光定量PCR的引物设计
2.3.3.2 荧光定量PCR
3 结果与分析
3.1 氟虫双酰胺对三种小菜蛾品系/种群的毒力测定
3.2 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律及交互抗性
3.2.1 氟虫双酰胺对小菜蛾的抗性汰选
3.2.2 小菜蛾氟虫双酰胺抗性品系对其他药剂的交互抗性
3.3 小菜蛾氟虫双酰胺抗性品系的生物学特性
3.4 小菜蛾抗氟虫双酰胺的抗性现实遗传力和风险评估
3.4.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性现实遗传力
3.4.2 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险评估
3.5 小菜蛾鱼尼丁受体基因序列与基因突变频率检测
3.5.1 小菜蛾鱼尼丁受体C-末端的克隆及基因序列比对分析
3.5.2 小菜蛾RyR基因突变频率检测结果分析
3.6 RyR在不同品系小菜蛾中的表达量
3.6.1 小菜蛾总RNA质量检测(PAGE法)
3.6.2 小菜蛾总RNA纯度和浓度的检测
3.6.3 荧光定量PCR的特异性和重复性
3.6.4 扩增效率
3.6.5 不同品系小菜蛾RyR基因的表达量
4 讨论
4.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律
4.2 抗氟虫双酰胺小菜蛾品系的生物学特性
4.3 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险评估
4.4 RyR基因突变频率的检测
4.5 不同品系RyR基因表达量的检测
4.6 有待继续研究的问题
5 结论
5.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律及风险评估
5.2 抗氟虫双酰胺小菜蛾的生物适合度
5.3 抗氟虫双酰胺小菜蛾RyR的基因突变频率
5.4 不同品系RyR的基因表达量的差异
本文创新之处
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
本文编号：3999146
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/nykj/3999146.html
教材专著
