梨小食心虫气味结合蛋白GmolOBP1和GmolOBP6的克

发布时间：2017-06-09 12:03

  本文关键词：梨小食心虫气味结合蛋白GmolOBP1和GmolOBP6的克隆、表达及功能研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：昆虫通过化学感器实现化学通讯,完成定位寄主植物和产卵场所,选择配偶和躲避天敌。昆虫借助味觉感器和嗅觉感器识别环境中的气味分子,其中以嗅觉感器研究较为清楚。嗅觉识别过程涉及一系列蛋白的参与,包括气味结合蛋白、气味受体、感觉神经元膜蛋白、气味降解酶和离子型受体。气味结合蛋白作为气味识别的起始蛋白,对昆虫生理和行为反应作用重大,明确其与气味分子的识别机制有助于更好的阐释梨小食心虫的化学通讯机制。本研究从梨小食心虫Grapholita molesta(Busck)触角转录本中筛选出2条气味结合蛋白基因GmolOBP1和GmolOBP6,对其进行基因克隆、原核表达、蛋白纯化及功能研究,并对3日龄成虫触角进行触角电位反应。实验结果表明:GmolOBP1和GmolOBP6开放阅读框长度分别为468和483 bp,编码前体氨基酸155和160个,信号肽由N端23和38个氨基酸残基构成;成熟蛋白均为酸性蛋白,等电点分别为5.10和4.75。同源性比对和进化树分析表明二者均有6个保守的半胱氨酸残基,属典型的气味结合蛋白,GmolOBP1与AconOBP1相似性高达67%。组织表达表明二者均可在成虫触角中表达,表达量丰富。IPTG浓度为0.2 mM时,两个蛋白表达量较高,经检测浓度为1.53和1.40 mg/ml。荧光结合试验中两个重组蛋白对醛类气味都表现出较好的结合能力,尤其是对癸醛和十二醛。GmolOBP1与十二醇的结合能力最强,Ki值为5.46μM,寄主植物挥发物中与癸醛结合能力较强,Ki值为13.14μM;GmolOBP6与顺-8-十二碳烯乙酸酯的结合能力最强,Ki值为6.93μM,与乙酸丁酯结合常数为11.89μM。顺-8-十二碳烯乙酸酯引发雄虫触角电位反应最强,超过1。两个蛋白对醛类物质的特异性结合反应有助于研究新型引诱剂,为梨小食心虫的生物防治提供新的思路和方法。
【关键词】：梨小食心虫 气味结合蛋白 组织表达 荧光结合试验 触角电位反应
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S433
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 第一章 文献综述10-18
• 1.1 昆虫嗅觉感器10-11
• 1.2 昆虫嗅觉感受机制11-12
• 1.3 昆虫气味结合蛋白12-16
• 1.3.1 种类与分布12
• 1.3.2 表达12-13
• 1.3.3 生理功能13
• 1.3.4 三维结构13-14
• 1.3.5 与气味分子的结合释放机制14-15
• 1.3.6 配体结合试验15-16
• 1.4 梨小食心虫与气味16
• 1.5 研究目的与意义16-17
• 1.6 研究内容与技术路线17-18
• 1.6.1 研究内容17
• 1.6.2 技术路线17-18
• 第二章 材料与方法18-25
• 2.1 材料18-20
• 2.1.1 供试虫源18
• 2.1.2 主要药剂18-20
• 2.2 方法20-25
• 2.2.1 基因扩增20-21
• 2.2.2 构建表达载体21-23
• 2.2.3 蛋白表达与纯化23-24
• 2.2.4 荧光结合试验24
• 2.2.5 触角电位反应（EAG）24-25
• 第三章 结果与分析25-37
• 3.1 基因分析25-30
• 3.2 蛋白表达30-32
• 3.3 组织表达32-33
• 3.4 荧光结合试验33-36
• 3.4.1 Gmol OBP133
• 3.4.2 Gmol OBP633-36
• 3.5 EAG反应36-37
• 第四章 结论与讨论37-39
• 参考文献39-45
• 附录45-47
• 致谢47-48
• 作者介绍48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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6 唐宇

本文编号：435347