玫烟色棒束孢耐热菌株的筛选及耐热相关机理的初步研究

发布时间：2017-10-09 05:38

  本文关键词：玫烟色棒束孢耐热菌株的筛选及耐热相关机理的初步研究

  更多相关文章： 玫烟色棒束孢 耐热性 毒力 超氧化物歧化酶 海藻糖 疏水蛋白 海藻糖水解酶

【摘要】：玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosue)是目前开发应用于防治农林害虫的昆虫病原真菌之一。昆虫病原真菌的杀虫效果除与菌种自身的毒力有关外,还在很大程度上受外界环境因素的影响,如温度、湿度、紫外线等。环境温度影响真菌制剂贮藏稳定性,而菌株的耐热性与真菌制剂的贮藏时间相关。因此生防制剂的有效成分(分生孢子或菌丝体)对环境的耐受力是影响制剂贮存时间和田间应用的重要因素。本研究进行了玫烟色棒束孢耐热菌株的筛选,并对其与耐热相关的生理生化作了初步研究,结果如下：1.将7株玫烟色棒束孢菌株的孢子悬浮液置于48℃恒温水浴热胁迫45min后,再滴于单凹玻片上培养36h,以孢子残存活率作为各菌株耐热力的指标。结果表明,供试菌株的残存活孢率相互之间差异显著,在28.70%-57.28%。其中,502、904和9606菌株热胁迫后存活率均达50%以上,表明它们具有较强的耐热性；14、511和609菌株孢子存活率为34.72%-36.00%,耐热性居中；而7606菌株孢子存活率仅为28.70%,耐热力较差。2.采用波特喷雾器测定玫烟色棒束孢不同耐热力菌株在同种浓度下对麦蚜的毒力。结果表明,耐热性较强的904菌株对麦蚜的致病力最高达90.20%,致死中时最短为2.67d。3.采用考马斯亮蓝(BRADFORD)法测定玫烟色棒束孢不同耐热力菌株疏水蛋白含量。结果表明,FAE蛋白含量在供试菌株间差异显著。耐热性较强的904菌株其疏水蛋白含量最高,这说明疏水蛋白含量与菌株耐热力具有相关性。4.采用氮蓝四唑法测定了不同耐热力菌株菌丝在不同温度热胁迫后的酶活水平。结果表明,不同耐热力的菌株菌丝中SOD酶活存在显著差异。当温度升高时,不同耐热力菌株的酶活水平都在提高,常温下高酶活的904菌株在高温胁迫后其酶活水平也较高,说明当菌株受到外界温度胁迫时,菌株体内SOD酶活提高以保护机体细胞正常的生理活动。5.采用Native-PAGE对不同耐热力菌株的菌丝粗酶液的活性电泳结果显示,不同耐热力菌株的粗酶提取液有且仅有一条相同的条带,说明供试菌株SOD为同一种酶型。6.采用蒽酮硫酸法测定了玫烟色棒束孢904菌株在不同温度胁迫后其胞内海藻糖的含量变化。结果显示,在3-6h的热激过程中,海藻糖含量随着胁迫温度的升高逐渐上升,胁迫9h后含量降低。在相同条件下,采用DNS法测定其海藻糖水解酶活力的变化,海藻糖水解酶的活力水平正好与海藻糖含量的变化相反,由此可知,胞内海藻糖和海藻糖水解酶的代谢参与了玫烟色棒束孢的耐热机制。
【关键词】：玫烟色棒束孢 耐热性 毒力 超氧化物歧化酶 海藻糖 疏水蛋白 海藻糖水解酶
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S476.12
【目录】：

• 摘要6-8
• 前言8-16
• 1 昆虫病原真菌的耐热机理8-14
• 1.1 超氧化物歧化酶对热胁迫的反应9-11
• 1.2 海藻糖对热激的响应11-12
• 1.3 真菌孢壁蛋白12-14
• 2 玫烟色棒束孢抗逆性研究14-15
• 3 本研究的目的与内容15-16
• 第一部分 玫烟色棒束孢耐热菌株的筛选16-21
• 1 材料与方法16-17
• 1.1 供试菌株16
• 1.2 培养基16
• 1.3 仪器与设备16
• 1.4 耐高温菌株的筛选16-17
• 1.4.1 孢子悬浮液的制备16-17
• 1.4.2 分生孢子耐热力测定17
• 1.5 玫烟色棒束孢不同耐热力菌株的毒力测定17
• 1.5.1 玫烟色棒束孢904菌株对麦蚜的毒力测定17
• 2 结果与分析17-20
• 2.1 分生孢子的耐热力17-18
• 2.2 玫烟色棒束孢不同耐热力菌株的毒力18-19
• 2.3 玫烟色棒束孢904对麦蚜的致死率19-20
• 3 讨论20-21
• 第二部分 玫烟色棒束孢耐热相关机理的初步研究21-34
• 1 材料与方法21-26
• 1.1 供试材料21
• 1.2 培养基与供试试剂21
• 1.3 标准溶液制备21-22
• 1.4 标准曲线的配制22
• 1.5 不同耐热力菌株疏水蛋白含量的测定22
• 1.6 SOD活性和酶型测定22-25
• 1.6.1 酶液制备22
• 1.6.2 酶活测定22-23
• 1.6.3 酶型测定23-25
• 1.7 玫烟色棒束孢904菌株海藻糖的测定25-26
• 1.8 玫烟色棒束孢904菌株海藻糖水解酶活力的测定26
• 2 结果与分析26-30
• 2.1 不同耐热力菌株的疏水蛋白含量26-27
• 2.2 玫烟色棒束孢不同耐热力菌株SOD活性27-28
• 2.3 不同耐热力菌株的酶型28
• 2.4 玫烟色棒束孢904菌株菌丝高温胁迫后海藻糖含量28-29
• 2.5 玫烟色棒束孢904菌株高温处理后海藻糖水解酶活力29-30
• 3 讨论30-34
• 参考文献34-40
• Abstract40-42
• 致谢42

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