前列腺癌LNCaP-AI+F细胞外泌体促进基质细胞WPMY-1功能活化

发布时间：2021-01-05 02:50

　　目的:探讨前列腺癌外泌体对基质细胞WPMY-1迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:超速离心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F细胞上清中的外泌体,电镜观察外泌体的典型形态结构,Zetaview检测外泌体的粒径分布,Wb鉴定外泌体标志蛋白及其他相关蛋白。将WPMY-1细胞与前列腺癌外泌体（40μg/ml）共孵育后,激光共聚焦显微镜观察WPMY-1细胞对PKH67标记的外泌体的摄取情况,Transwell实验检测WPMY-1细胞迁移和侵袭能力,qPCR检测IL-8、PDGFB和MMP9等三种肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblast,CAF）分子表达水平,Wb检测EGFR和ERK1/2蛋白磷酸化水平。结果:电镜下可观察到典型茶托状外泌体结构,外泌体粒径分布集中在100 nm左右,其标志蛋白CD63和ALIX的表达证实了所提取颗粒为外泌体。此外,外泌体还表达EGFR、HER2和SRC等三种与前列腺癌进展相关的蛋白。WPMY-1细胞与外泌体共孵育后,共聚焦显微镜下可看到该细胞摄取大量外泌体,明显促进WPMY-1细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01）;与... 

【文章来源】：中国肿瘤生物治疗杂志. 2019年03期 北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞株及主要试剂
    1.2 细胞培养
    1.3 外泌体分离与鉴定
    1.4 外泌体摄取实验检测WPMY-1细胞摄取外泌体情况
    1.5 qPCR检测CAF相关分子表达的水平
    1.6 Wb检测LNCaP-AI+F细胞外泌体蛋白及外泌体处理后WPMY-1细胞中磷酸化蛋白的表达水平
    1.7 Transwell实验检测WPMY-1细胞迁移和侵袭能力
    1.8 统计学处理
2 结果
    2.1 外泌体鉴定及其相关蛋白表达
    2.2 WPMY-1细胞大量摄取LNCaP-AI+F细胞来源的外泌体
    2.3 LNCaP-AI+F外泌体提高WPMY-1细胞迁移和侵袭能力
    2.4 LNCaP-AI+F外泌体促进WPMY-1细胞高表达IL-8、PDGFB和MMP9
    2.5 LNCaP-AI+F外泌体促进WPMY-1 EGFR信号通路活化
3 讨论



本文编号：2957871