消癌解毒方中白花蛇舌草抑制结肠癌的作用及机制研究

发布时间：2021-05-20 06:43

　　目的：国医大师周仲瑛教授基于癌毒理论总结的消癌解毒方在临床中已证实其卓越的疗效,周教授基于癌毒理论治疗各组肿瘤最常用的君药为白花蛇舌草,其在各肿瘤组方中使用频率高达74%,尤其在消化系统肿瘤如结肠癌中,白花蛇舌草更是一直居于周仲瑛教授抗癌组方最重要的地位。中药抗癌虽然在结肠癌治疗中居于较重要地位,但即使像白花蛇舌草这样一味抗癌超级明星中药,其在抑制肿瘤生长中的作用及机制仍不清楚,本研究拟探讨白花蛇舌草抗结肠癌的作用及其分子机制。方法：结肠癌HCT-116、Lovo、HT-29和DLD-1细胞购自中国医学科学院细胞库,结肠癌原代细胞来自无锡市人民医院手术切除标本。细胞培养于并维持在RPMI/DMEM培养基中,加入10%的FBS,青霉素/链霉素（1:100, Sigma）,培养在37℃ CO2培养箱中,取对数生长期细胞用于实验。细胞给予白花蛇舌草浓度（Ctrl、10、25、50、 200μg/ml）和指定的时间（0、6h、24h、48h、72h、96h）,显微镜下观察细胞形态,运用MTT方法检测细胞存活率,同时对细胞进行台盼蓝染色,计算活细胞率；运用组蛋白DNA-ELISA及Annexin... 

【文章来源】：南京中医药大学江苏省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词
前言
    参考文献
第一章 理论研究
    第一节 “癌毒”理论及医治大法探讨
        1 “癌毒”理论
        2. 癌毒的医治方法
        参考文献
    第二节 白花蛇舌草在癌毒辨治中的地位
        2.1 白花蛇舌草
        2.2 白花蛇舌草药用价值
        2.3 白花蛇舌草与癌毒辨治
        2.4 白花蛇舌草与肿瘤医治
        参考文献
    第三节 中药抗肿瘤机制研究新进展
        3.1 干预肿瘤增殖周期,诱导细胞凋亡和自噬
        3.2 活化AMPK通路
        3.3 抑制肿瘤血管生成
        3.4 抑制细胞外基质的降解
        3.5 抗多药耐药作用
        3.6 Hedgehog信号通路
        参考文献
第二章 实验研究
    第一节 白花蛇舌草诱导结肠癌细胞凋亡及程序性坏死
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
        4. 结论
        5. 参考文献
    第二节 白花蛇舌草提取物(OLDENLANDIA DIFFUSA EXTRACTS)活化AMPK的作用
        1. 材料与方法
        2. 结果
        3. 讨论
        4. 结论
        5. 参考文献
    第三节 白花蛇舌草提取物活化AMPK的下游通路及机制研究
        1. 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 细胞株及细胞培养
            1.3 结肠癌组织原代肿瘤细胞培养
            1.4 MTT法检测结肠癌细胞生长抑制率
            1.5     ELISA检测细胞调亡
            1.6 台盼蓝（trypan blue)染色检测细胞死亡
            1.7 磷脂酰丝氨酸外翻分析流式细胞仪检测细胞凋亡 (AnnexinV法）
            1.8 LDH分析法检测细胞死亡率
            1.9 线粒体免疫共沉淀(Mitochondrial immunoprecipitation)
            1.10 短发夹RNA(shRNA)及稳定细胞的选择
            1.11 AMPK显性失活突变细胞制备
            1.12 Western Blot(蛋白质印迹)
            1.13 免疫组化技术
            1.14 在体裸鼠结肠癌种植模型
            1.15 统计学处理
        2 结果
            2.1 免疫共沉淀验证白花蛇舌草提取物激活HCT-116细胞AMPK-p53通路
            2.2 白花蛇舌草提取物激活HCT-116结肠癌细胞中AMPK-p53信号通路
            2.3 p53 RNAi和DN-p53阻断白花蛇舌草提取物诱导的结肠癌细胞凋亡
            2.4 白花蛇舌草提取物激活原代结肠癌细胞中AMPK-p53信号通路
            2.5 白花蛇舌草提取物对裸鼠HCT-116结肠癌移植瘤有明显抑制作用
            2.6 白花蛇舌草提取物作用的裸鼠移植瘤内AMPK-p53通路蛋白表达
            2.7 激活AMPK诱导促癌基因(EGFR、PDGFRα/β和FSCN1)溶酶体转位和降解
        3 讨论
        4 结论
        5 参考文献
结论
本研究的创新点
本研究的不足
参考文献
攻读博士学位期间取得的研究成果
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]康莱特注射液用于肺癌化疗患者效果观察[J]. 马向民,李立,史风超,温士旺,王桂琦.  山东医药. 2014(18)
[2]半枝莲、白花蛇舌草抗肿瘤的研究进展[J]. 罗金强,刘宏斌.  现代肿瘤医学. 2014(02)
[3]人参皂甙Rg3对Lewis肺癌细胞体外增殖及荷瘤小鼠免疫功能的影响[J]. 张玉梅,王家晓.  实用临床医药杂志. 2014(01)
[4]白花蛇舌草提取物对结肠癌细胞抑制作用的实验研究[J]. 伍治平,金从国,李佳,陈晓群,姚乾,朱启顺.  昆明医科大学学报. 2013(10)
[5]白花蛇舌草提取物抗小鼠结直肠癌血管生成的实验研究[J]. 肖云,伍治平,金从国,李佳,陈晓群,姚乾,朱启顺.  昆明医科大学学报. 2013(10)
[6]白花蛇舌草抗肝癌H22小鼠血道转移的实验研究[J]. 李洁,孙静,宋健.  时珍国医国药. 2012(10)
[7]论癌症以毒攻毒治法[J]. 章永红,章迅,叶丽红,彭海燕.  南京中医药大学学报. 2012(02)
[8]白花蛇舌草化学成分及其药理作用研究进展[J]. 刘盼盼,姚晓东,李洁.  中国药业. 2011(21)
[9]人参皂苷Rg3对NK细胞与K562细胞的结合率及毒性作用影响的实验研究[J]. 王英,楼建国.  中药材. 2011(08)
[10]白花蛇舌草对5-Fu的增效减毒作用研究[J]. 刘智勤,陈鹊汀,朱惠学,李岩,蒋玉凤.  时珍国医国药. 2011(01)



本文编号：3197290