变形链球菌LuxS基因缺陷株的构建及密度感应分子AI-2活性的检测

发布时间：2021-05-25 09:50

　　目的：本研究利用现代分子生物学技术构建用于转化变链菌的LuxS基因同源重组质粒载体，利用所构建质粒电转化变链菌以敲除变链菌中LuxS基因，构建LuxS基因缺失的变链菌突变株。采用哈氏弧菌生物荧光检测法对变链菌标准株和LuxS基因突变株的AI-2活性进行对比研究，为进一步研究AI-2信号感应系统对变链菌致龋毒力的调控机制奠定基础。方法：1．提取变链菌基因组DNA及红霉素抗性质粒PJT10，使用Premier5.0引物设计软件设计引物，通过嵌套式PCR的方法，分别扩增出变链菌LuxS基因的上、下游片段及质粒PJT10的红霉素抗性基因片段。2．将PCR所获得的3条片段依次采用相应的双酶切反应酶切后采用T4连接酶连接入载体质粒PUC19，按“LuxS上游序列～红霉素抗性基因～LuxS下游序列”的排列顺序连接，以构建目的质粒pUCluxKO重组载体。3．将突变载体电转化到含完整LuxS基因的突变受体S．mutans菌株中，红霉素抗性筛选出LuxS基因缺失的变链菌突变株，并经PCR和生物荧光检测法鉴定。4．分别培养变链菌和哈氏弧菌BB170，通过制备变链菌无细胞上清液，以新配制的TPY培养基为阴性... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
英文缩写及译名
前言
实验一
实验二
实验三
实验四
结论
参考文献
综述
致谢



本文编号：3205131