鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（LaSota株+HP株）制备技术的研究
发布时间：2021-12-08 21:56
本研究以鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（LaSota株+HP株）生产过程中的关键环节,如病毒繁殖、抗原浓缩、灭活、乳化等为研究对象,探讨上述生产过程中的质量控制要点,为完善该二联苗生产提供数据借鉴和科学依据。1、病毒繁殖:新城疫病毒（La Sota株）及禽流感病毒（H9亚型HP株）分别接毒鸡胚后,检测不同培养时间段病毒的的效价。结果表明新城疫的最佳培养时间为96h,-15℃保存不宜超过3个月,流感的最佳培养时间为96h,-15℃保存不宜超过2个月。2、超滤浓缩:新城疫、禽流感两种抗原浓缩不同倍数后,对比病毒含量、血凝价以及免疫效果,根据试验数据并结合生产实际,筛选出了新城疫、禽流感最适的浓缩倍数均为2倍3、灭活剂浓度与灭活时间:对比了不同浓度甲醛、不同灭活时间对新城疫和禽流感病毒灭活效果,结果表明上述两种抗原用甲醛溶液最适灭活浓度均为0.1%,最佳灭活时间分别为16h和18h。4、乳化试验:通过乳化时间、乳化速度进行对比,筛选出稳定性最好的条件是3000r/min乳化45～75min。对新城疫抗原、禽流感抗原以及油相不同比例乳化的样品进行免疫效果对比试验,筛选出水相油相最佳比...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１新城疫抗体水平??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ?ｄｉｓｅａｓｅ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｅｖｅｌ??
第三章超滤浓缩效果评价??９??Ｓ??■＂■ｉｌｌ?Ｉ??Ｄｄ?７ｄ?１４ｄ?２１ｄ?２８ｃ３?３５ａ??＿?Ａ组（未苯缔遙奇感抗体邰分〉＿?Ｂ绝＜?２掐浓缩遙宏感抗体邰分＞??■翔（４倍浓缔盒流感抗体？部分）＿以百（６街衣缩墓流感抗体部分〉??＿Ｅ组（对照衾流慼抗忭部分〉??图３－２禽流感抗体水平??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２?Ａｖｉａｎ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｅｖｅｌｓ??３讨论??病毒性灭活疫苗中，单苗病毒含量充足，免疫效果确实，但是只能预防与之??对应的一种病毒性疾病，要同时预防多种疾病，就必须同时使用多种单苗分几次??注射接种，这样做不紧对鸡群造成应激也会影响生产性能和抗病能力？７］，而且也??浪费人力物力。所以联苗的生产中非常重要的工艺是如何提高抗原中的病毒含量，??即抗原浓缩纯化技术得到了广泛的研究和应用。目前通常使用的抗原浓缩技术主??要有浓缩胶浓缩法、沉淀浓缩法、离心浓缩法、透析浓缩法、冷冻干燥法和过滤??浓缩法膜分离技术是超滤浓缩的主要原理，本技术是指使用半透膜，在常温??下通过膜的渗透作用，在化学位差或外界能量的推动下，对两组分或多组分混合气??体或液体进行分级、分离、富集和提纯的技术［１１９］。??本研究使用密理博的超滤膜浓缩系统，对新城疫和禽流感两种抗原进行了不??同倍数的浓缩试验，病毒含量和血凝价都随着浓缩倍数呈升高趋势，但并不完全??呈线性增长。新城疫浓缩前效价是ｌ〇ｉ６３ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ，浓缩２倍效价是１０９＋８３ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ，??浓缩４倍和６倍都是１０１Ｑ３８ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ差异不明显。禽流感浓缩前效价１０９＋５ＥＩＤ５Ｑ／ｍｌ，??浓缩２倍和４倍效价
第五章乳化试验??口?６，倒置黏度计，将管口?１插入供试品（或供试溶液，下同）中，自橡皮管的另一??端抽气，使供试品充满球２与３并达到测定线ｂ处，提出黏度计并迅速倒转，抹去黏??附于管外的供试品，取下橡皮管使连接于管口?１上，将黏度计垂直固定于恒温水浴中，??并使水浴的液面高于球２的中部，放置１５ｍｉｎ后，自橡皮管的另一端抽气，使供试品??充满球３并超过测定线ａ，开放橡皮管口，使供试品在管内自然下落，用秒表准确记??录液面自测定线ａ下降至测定线ｂ处的流出时间。依法重复测定３次以上，每次测定??值与平均值的差值不得超过平均值的±５％。另取一份供试品同样操作，并重复测定３??次以上。以先后两次取样测得的总平均值按下式计算，即为供试品的运动黏度或供试??溶液的动力黏度。??｜Ｊ??ｒｉ?一??Ｉ?！卜、上??！??■?ｊ??Ｉ??图４－１为平氏黏度计??ＦＩＧ．?４－１?Ｔａｉｒａ?ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ??１．主管?２．缓冲球?３．测定球?４．毛细管?５．储器?６．宽管??７．支管?ａ，?ｂ．环形测定线??运动黏度（ｍｍ２／ｓ）＝Ｋｔ??动力黏度（ＣＰ）＝?Ｋｔ＇ｐ??式中：??Ｋ一为用已知黏度的标准液测得的黏度计常数，ｍｍ２／Ｓ２；??Ｔ一为测得的平均流出时间，ｓ；??３６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同佐剂的新城疫疫苗免疫效果的研究[J]. 施建春,杨惠萍. 山西农业大学学报(自然科学版). 2014(06)
[2]鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联油乳剂灭活疫苗免疫效力试验[J]. 白军,刘淑红,焦铁军,王运宏,黄建斌,李河林,马建玲,赵希斌,于三科. 动物医学进展. 2013(03)
[3]水禽用H5亚型禽流感灭活疫苗对高致病性禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果研究[J]. 吴涛,毛娅卿,王嘉,王哲,蒋桃珍. 中国兽药杂志. 2013(03)
[4]新城疫浓缩灭活疫苗的初步研究[J]. 李俊平,李启红,杨承槐,刘丹,李慧姣,蒋桃珍,黄建华. 中国兽药杂志. 2012(12)
[5]8种中药多糖及其硫酸化衍生物对新城疫病毒的影响[J]. 王春花,金秧敏,张燕华,李春艳,张秀英. 中国兽医杂志. 2012(08)
[6]鸡新城疫病毒感染不同细胞的病变特性研究[J]. 豆艳丽,吴润,刘磊. 甘肃农业大学学报. 2012(02)
[7]2010—2011年河南省部分地区H9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行病学调查[J]. 岳旭龙,陈礼朋,李双亮,高文明,张宇耕,崔保安,李新生. 中国农学通报. 2012(08)
[8]汉中市雏鸡群H9亚型禽流感病毒和新城疫病毒混合感染的血清学诊断[J]. 韩永刚,莫虹斐,徐小虎,何建亮,罗晓荣,陈树林. 动物医学进展. 2012(02)
[9]影响鸡新城疫（La Sota株）活疫苗抗原病毒含量因素的探讨[J]. 江兴华. 福建畜牧兽医. 2011(04)
[10]H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究[J]. 李俊平,赵双成,常晓飞,柳金雄,曾显营,卫星辉,李福基,姜永萍,陈化兰. 中国预防兽医学报. 2011(03)
硕士论文
[1]禽流感（H9亚型）灭活疫苗乳化工艺优化[D]. 王斌.南京农业大学 2013
[2]禽流感病毒抗原浓缩方法的建立及浓缩疫苗对鸡体免疫效果的研究[D]. 李爱芬.河南农业大学 2009
本文编号：3529312
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１新城疫抗体水平??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ?ｄｉｓｅａｓｅ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｅｖｅｌ??
第三章超滤浓缩效果评价??９??Ｓ??■＂■ｉｌｌ?Ｉ??Ｄｄ?７ｄ?１４ｄ?２１ｄ?２８ｃ３?３５ａ??＿?Ａ组（未苯缔遙奇感抗体邰分〉＿?Ｂ绝＜?２掐浓缩遙宏感抗体邰分＞??■翔（４倍浓缔盒流感抗体？部分）＿以百（６街衣缩墓流感抗体部分〉??＿Ｅ组（对照衾流慼抗忭部分〉??图３－２禽流感抗体水平??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２?Ａｖｉａｎ?ｉｎｆｌｕｅｎｚａ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｅｖｅｌｓ??３讨论??病毒性灭活疫苗中，单苗病毒含量充足，免疫效果确实，但是只能预防与之??对应的一种病毒性疾病，要同时预防多种疾病，就必须同时使用多种单苗分几次??注射接种，这样做不紧对鸡群造成应激也会影响生产性能和抗病能力？７］，而且也??浪费人力物力。所以联苗的生产中非常重要的工艺是如何提高抗原中的病毒含量，??即抗原浓缩纯化技术得到了广泛的研究和应用。目前通常使用的抗原浓缩技术主??要有浓缩胶浓缩法、沉淀浓缩法、离心浓缩法、透析浓缩法、冷冻干燥法和过滤??浓缩法膜分离技术是超滤浓缩的主要原理，本技术是指使用半透膜，在常温??下通过膜的渗透作用，在化学位差或外界能量的推动下，对两组分或多组分混合气??体或液体进行分级、分离、富集和提纯的技术［１１９］。??本研究使用密理博的超滤膜浓缩系统，对新城疫和禽流感两种抗原进行了不??同倍数的浓缩试验，病毒含量和血凝价都随着浓缩倍数呈升高趋势，但并不完全??呈线性增长。新城疫浓缩前效价是ｌ〇ｉ６３ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ，浓缩２倍效价是１０９＋８３ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ，??浓缩４倍和６倍都是１０１Ｑ３８ＥＩＤ５Ｇ／ｍｌ差异不明显。禽流感浓缩前效价１０９＋５ＥＩＤ５Ｑ／ｍｌ，??浓缩２倍和４倍效价
第五章乳化试验??口?６，倒置黏度计，将管口?１插入供试品（或供试溶液，下同）中，自橡皮管的另一??端抽气，使供试品充满球２与３并达到测定线ｂ处，提出黏度计并迅速倒转，抹去黏??附于管外的供试品，取下橡皮管使连接于管口?１上，将黏度计垂直固定于恒温水浴中，??并使水浴的液面高于球２的中部，放置１５ｍｉｎ后，自橡皮管的另一端抽气，使供试品??充满球３并超过测定线ａ，开放橡皮管口，使供试品在管内自然下落，用秒表准确记??录液面自测定线ａ下降至测定线ｂ处的流出时间。依法重复测定３次以上，每次测定??值与平均值的差值不得超过平均值的±５％。另取一份供试品同样操作，并重复测定３??次以上。以先后两次取样测得的总平均值按下式计算，即为供试品的运动黏度或供试??溶液的动力黏度。??｜Ｊ??ｒｉ?一??Ｉ?！卜、上??！??■?ｊ??Ｉ??图４－１为平氏黏度计??ＦＩＧ．?４－１?Ｔａｉｒａ?ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ??１．主管?２．缓冲球?３．测定球?４．毛细管?５．储器?６．宽管??７．支管?ａ，?ｂ．环形测定线??运动黏度（ｍｍ２／ｓ）＝Ｋｔ??动力黏度（ＣＰ）＝?Ｋｔ＇ｐ??式中：??Ｋ一为用已知黏度的标准液测得的黏度计常数，ｍｍ２／Ｓ２；??Ｔ一为测得的平均流出时间，ｓ；??３６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同佐剂的新城疫疫苗免疫效果的研究[J]. 施建春,杨惠萍. 山西农业大学学报(自然科学版). 2014(06)
[2]鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联油乳剂灭活疫苗免疫效力试验[J]. 白军,刘淑红,焦铁军,王运宏,黄建斌,李河林,马建玲,赵希斌,于三科. 动物医学进展. 2013(03)
[3]水禽用H5亚型禽流感灭活疫苗对高致病性禽流感病毒流行毒株的免疫保护效果研究[J]. 吴涛,毛娅卿,王嘉,王哲,蒋桃珍. 中国兽药杂志. 2013(03)
[4]新城疫浓缩灭活疫苗的初步研究[J]. 李俊平,李启红,杨承槐,刘丹,李慧姣,蒋桃珍,黄建华. 中国兽药杂志. 2012(12)
[5]8种中药多糖及其硫酸化衍生物对新城疫病毒的影响[J]. 王春花,金秧敏,张燕华,李春艳,张秀英. 中国兽医杂志. 2012(08)
[6]鸡新城疫病毒感染不同细胞的病变特性研究[J]. 豆艳丽,吴润,刘磊. 甘肃农业大学学报. 2012(02)
[7]2010—2011年河南省部分地区H9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行病学调查[J]. 岳旭龙,陈礼朋,李双亮,高文明,张宇耕,崔保安,李新生. 中国农学通报. 2012(08)
[8]汉中市雏鸡群H9亚型禽流感病毒和新城疫病毒混合感染的血清学诊断[J]. 韩永刚,莫虹斐,徐小虎,何建亮,罗晓荣,陈树林. 动物医学进展. 2012(02)
[9]影响鸡新城疫（La Sota株）活疫苗抗原病毒含量因素的探讨[J]. 江兴华. 福建畜牧兽医. 2011(04)
[10]H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究[J]. 李俊平,赵双成,常晓飞,柳金雄,曾显营,卫星辉,李福基,姜永萍,陈化兰. 中国预防兽医学报. 2011(03)
硕士论文
[1]禽流感（H9亚型）灭活疫苗乳化工艺优化[D]. 王斌.南京农业大学 2013
[2]禽流感病毒抗原浓缩方法的建立及浓缩疫苗对鸡体免疫效果的研究[D]. 李爱芬.河南农业大学 2009
本文编号：3529312
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