TRPC6通道选择性小分子抑制剂的筛选及评价

发布时间：2021-01-23 13:02

　　背景:TRPC6是经典瞬时受体电位通道家族成员之一,在哺乳动物的脑、心脏、肾脏和肺等多种组织器官中均有表达,并且在血管平滑肌收缩、足细胞信号转导、中枢神经发育和疼痛调节等多种生理过程中发挥重要的作用。TRPC6蛋白作为组成细胞膜Ca²⁺通道的分子基础,其基因变异导致的蛋白异常表达可引起细胞内Ca²⁺信号通路改变,从而导致心肌肥厚、肺动脉收缩、神经元发育异常、肿瘤细胞增殖等多种病理改变,诱发多种疾病。TRPC6作为众多疾病的潜在治疗靶点,其小分子调节剂逐渐成为新药研究的热点之一。然而,由于TRPC家族成员众多,且不同成员间氨基酸序列同源性较高,因此有关TRPC6特异性小分子调节剂的报道并不多见。目的:使用计算机辅助药物设计（computer aided drug design,CADD）的方法从天然小分子化合物库中虚拟筛选可能和TRPC6蛋白结合的小分子化合物;运用分子间相互作用分析技术测定TRPC6蛋白和小分子化合物间的相互作用;建立过表达TRPC6蛋白的工具细胞,通过检测细胞内钙离子浓度(intracellular calcium conc... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：132 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

IRX模板与TRPC6序列的对比分析

空军军医大学硕士学位论文-32-图3.化合物和不同口袋结合示意图。（A）化合物和2号口袋结合（B）化合物和3号口袋结合（C）化合物和10号口袋结合（D）化合和13号口袋结合（E）化合物和31号口袋结合（F）化合物和18、19、32号口袋结合，浅绿色标记区域为18号

空军军医大学硕士学位论文-52-1:5000），将膜放入一抗工作液中，4℃孵育过夜。10）二抗孵育：PBST洗除一抗10min×3次，二抗（PBST稀释，1:5000）室温摇床上孵育1.5h。11）化学发光：PBST洗除二抗10min×3次，将膜置于化学发光成像系统中，滴加ECL发光液，拍照并使用Image-ProPlus6.0软件分析条带灰度值。1.2.5数据统计与分析采用SPSS22.0软件进行数据分析，所有数据用均数±标准误（Mean±SEM）表示，两组间均数比较使用两样本t检验；多组间均数比较使用单因素方差分析（one-way），组间两两比较使用Turkey法。以显著水平α=0.05，P<0.05（双侧）表示组间差异有统计学意义。1.3结果采用Western-Blot对各组细胞中TRPC6蛋白的表达量进行检测，结果（Fig6）显示，实验组（Lv105-TRPC6group）中TRPC6表达量比空白对照组（untreatedgroup）升高6.94倍（P<0.01）。阴性对照组（Lv-controlgroup）与空白对照组（untreatedgroup）比较，差异无统计学意义（P>0.05）。表明慢病毒转染成功，TRPC6蛋白在实验组细胞中过表达，HEK293hTRPC6工具细胞构建成功。图6.慢病毒转染HEK293细胞后，细胞TRPC6表达量显著上调。(A)TRPC6的免疫印迹条带图；(B)条带灰度值分析。n=3，**P<0.01。Fig6.TheexpressionofTRPC6wassignificantlyupregulatedafterLv-TRPC6transfectedintoHEK293cells.(A)RepresentativeWesternblotimagesofTRPC6in


本文编号：2995261