长江三角洲白山羊优质笔料毛性状差异蛋白质组学研究

发布时间：2017-03-28 12:01

  本文关键词：长江三角洲白山羊优质笔料毛性状差异蛋白质组学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：长江三角洲白山羊是世界上生产优质笔料毛的山羊品种。而优质笔料毛是制作高档毛笔的原材料,由其制成的湖笔,笔峰尖锐整齐,丰满圆润,健劲有力,享有“毛颖之技甲天下”之美誉,与徽墨、宣纸、端砚一起,被共誉为“文房四宝”。毛笔作为中国文化的历史传承,在汉文化的传播过程中起到了重要作用,而长江三角洲笔料毛山羊作为取材来源之一,其优质笔料毛的价值深受重视。 本研究从蛋白质水平上对长江三角洲白山羊优质笔料毛性状形成的机理进行研究,建立优质笔料毛型和非优质笔料毛型山羊皮肤双向凝胶电泳(2-DE)图谱,筛选鉴定差异表达蛋白质,旨在寻找与山羊皮肤中优质笔料毛性状相关的蛋白,进而通过氨基酸序列预测基因序列,为优质笔料毛基因克隆以及进一步的分子育种工作奠定基础。 本试验采集6-8月龄的优质笔料毛型和非优质笔料毛型(对照组)半同胞公羔颈脊部皮肤,提取总蛋白,蛋白上样量1000μg,进行等点聚焦,平衡后进行第二向SDS-PAGE,采用考马斯亮蓝染色法染色,扫描图像,PDquest8.0软件分析,识别差异表达蛋白点,采用Ultraflex III TOF/TOF串联质谱仪进行质谱扫描,Mascot2.3搜索引擎查询NCBInr数据库,鉴定差异表达蛋白质。 研究结果表明：(1)采用双向电泳技术获得了优质笔料毛型和非优质笔料毛型长江三角洲白山羊皮肤2-DE表达图谱；(2)通过PDquest8.0软件分析出33个差异表达蛋白点,其中20个蛋白点在优质笔料毛型皮肤中上调,13个蛋白点在非优质笔料毛型皮肤中上调；(3)选取符合鉴定标准的10个差异蛋白点做质谱分析,通过Ultraflex III TOF/TOF串联质谱仪获得10张肽指纹图谱(PMF)；(4)对质谱数据进行分析鉴定后,最终得到4个差异表达蛋白质,分别为纤维蛋白原p链亚型1、ATP合成酶p亚基、琥珀酰辅酶A：3-酮酸-辅酶A转移酶1和p肌动蛋白。其中,纤维蛋白原p链亚型1和ATP合成酶p亚基在优质笔料毛型山羊皮肤中上调,琥珀酰辅酶A：3-酮酸-辅酶A转移酶1和p肌动蛋白在非优质笔料毛型山羊皮肤中上调。 分析结果表明：(1)纤维蛋白原p链亚型1可以通过影响血液黏度介导细胞的粘附和增殖,并促进细胞的迁移和侵袭,从血供上影响毛囊生长与发育,利于皮质层的形成。同时对皮质细胞的粘附、增殖等生理功能起到了一定作用,从而促进了毛干无髓段的形成；(2)ATP合成酶p亚基可通过促进ATP合成与水解,为角朊细胞的合成提供能量,供能较多时使角朊合成过剩,为皮质层的增多提供可能,从而促进了毛干无髓段的形成；(3)琥珀酰辅酶A：3-酮酸-辅酶A转移酶1可通过雄激素来影响毛囊毛球部分对毛干生成的作用,同时还可能通过细胞增殖促进毛干髓质层高表达蛋白的合成,从而促进毛干髓质层的形成；(4)p肌动蛋白和角蛋白相互作用并共同参与促进毛囊发育相关细胞的胞内运输、细胞形状、移动和分裂等生理功能,对于维持髓质层中的角质骨小梁物理形态、限制髓质层的角质细胞中膜蛋白的移动起到一定作用,从而利于多孔结构的髓质层的形成。 本研究建立了分辨率高和重复性好的优质笔料毛型和非优质笔料毛型山羊皮肤2-DE图谱,识别鉴定出一些与优质笔料毛形成相关的差异表达蛋白质,为进一步研究长江三角洲白山羊优质笔料毛形成的分子机制奠定了良好基础。
【关键词】：长江三角洲白山羊 优质笔料毛 双向凝胶电泳 蛋白质组学
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 符号、缩略词表9-11
• 1 文献综述11-21
• 1.1 长江三角洲白山羊笔料毛的基本概况11-13
• 1.1.1 山羊毛分类11
• 1.1.2 笔料毛的研究11
• 1.1.3 长江三角洲白山羊笔料毛的价值地位11-12
• 1.1.4 长江三角洲白山羊的品种保护现状12-13
• 1.2 羊毛的研究概况13-17
• 1.2.1 山羊毛囊及羊毛的概况13-15
• 1.2.2 影响羊毛生长发育的因素15-17
• 1.3 蛋白质组学的研究概况17-20
• 1.3.1 蛋白质组学的基本概况17-18
• 1.3.2 蛋白质组学在动物上的研究进展18-20
• 1.3.3 蛋白质组学在皮肤上的研究现状20
• 1.4 本研究的目的和意义20-21
• 2. 材料与方法21-27
• 2.1 试验材料21-23
• 2.1.1 试验样品的准备21
• 2.1.2 主要仪器设备21
• 2.1.3 主要试剂21-22
• 2.1.4 溶液的配制22-23
• 2.2 试验方法23-27
• 2.2.1 皮肤蛋白的提取23
• 2.2.2 蛋白浓度的测定23-24
• 2.2.3 双向电泳24-25
• 2.2.4 凝胶图像扫描及分析25
• 2.2.5 凝胶块中蛋白质酶解25-26
• 2.2.6 差异蛋白谱分析及数据库检索鉴定26-27
• 3 结果与分析27-41
• 3.1 优质笔料毛型与非优质笔料毛型山羊颈脊部皮肤2-DE蛋白质图谱分析27-29
• 3.1.1 双向电泳体系的分辨率和重复性27-28
• 3.1.2 山羊皮肤组织双向凝胶电泳图谱28-29
• 3.2 差异表达蛋白点的质谱鉴定及数据库检索29-32
• 3.3 差异表达蛋白质的鉴定结果与分析32-41
• 3.3.1 蛋白点6809为纤维蛋白原β链亚型132-33
• 3.3.2 蛋白点2702为ATP合成酶β亚基33-34
• 3.3.3 蛋白点8812为琥珀酰辅酶A：3-酮酸-辅酶A转移酶134
• 3.3.4 蛋白点3712和3713为β-肌动蛋白34-36
• 3.3.5 蛋白点701、3410、3417、4701和6713为血清白蛋白前体36-41
• 4 讨论41-46
• 4.1 样品采集制备及优质笔料毛蛋白的差异蛋白质组学41-42
• 4.1.1 样品采集制备条件41
• 4.1.2 优质笔料毛蛋白的差异蛋白质组学41-42
• 4.2 笔料毛相关蛋白分析42-45
• 4.2.1 纤维蛋白原p链亚型1与毛纤维生长的关系42
• 4.2.2 ATP合成酶β亚基与毛纤维生长的关系42-43
• 4.2.3 琥珀酰辅酶A：3-酮酸-辅酶A转移酶1与毛纤维生长的关系43-44
• 4.2.4 β肌动蛋白与毛纤维生长的关系44-45
• 4.3 需要进一步研究的内容45-46
• 5 结论46-47
• 参考文献47-55
• 附录55-60
• 致谢60-61
• 攻读硕士学位期间发表学术论文及获得专利情况61-62

【参考文献】

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本文编号：272194