基于太赫兹时域光谱技术的生物分子鉴别及相互作用研究

发布时间：2020-09-18 10:49

　　太赫兹波(Terahertz wave,THz)是指频率介于0.1-10THz之间的电磁辐射,处于电子学到光子学的过渡区域。作为光谱测量技术的一个重要手段,太赫兹时域光谱(THz-TDS)技术展现出独特的优势。太赫兹技术为生物学、物理学、化学等诸多学科的发展提供了新的研究手段。太赫兹波技术在林业科学相关研究、食品质量安全、医学检测及诊断、爆炸物检测、太赫兹通信、有机生物分子探测、天文遥感等方面都很好的应用前景。太赫兹时域光谱技术可同时测量电场的相位和幅度,经傅里叶变换,样本材料在该波段的吸收系数、折射率以及复介电常数等参数都可以获得。太赫兹电磁波谱与有机物及生物分子(如DNA、RNA、蛋白质等)的转动和振动能量对应,是研究生物分子和有机物方面非常有效的工具。太赫兹辐射光子能量非常低,在进行生物检测时不会造成生物电离;同时太赫兹波属于远红外和毫米波范畴,具有低散射的特点。以上优点使太赫兹做生物检测时具有天然的优势。本文在国家973计划“活细胞的太赫兹波无标记检测技术基础研究”(2015CB755401),国家自然科学基金项目“‘十二五’国家科技支撑计划项目”(2012BAK04B03),重庆市科学技术委员会项目“太赫兹复合材料无损检测成像设备”(cstc2013yykfC00007)的共同资助下,利用太赫兹时域光谱技术鉴别固相生物分子的种类;研究液相生物分子的相互作用;与超材料相结合,鉴别液相生物分子种类;研究液相生物分子间的相互作用。主要研究内容如下:1、对应用太赫兹光谱技术研究生物分子的研究现状进行了详细梳理与总结;重点介绍了与用THz-TDS技术检测固相样本、液相样本以及液相样本与超材料结合相关的研究成果;对后续章节中实验中用到的样品制作工艺和实验设备进行描述。在此基础上,提出本文的主要研究思路和内容。2、详细说明了不同生物分子样本的制作流程及注意事项;对太赫兹辐射源的工作原理、结构及太赫兹波的探测手段和方法进行介绍;介绍了THz-TDS系统的工作原理及结构;重点讨论了透射式THz-TDS技术的原理和系统结构以及提取材料参数的理论依据和方法。3、对外观相似,直观上难以区分,且没有明显的特征吸收峰的固相生物分子进行鉴别,首先利用主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)提取了不同生物分子样本的透射光谱数据的主成分,然后结合基于网格搜索算法的支持向量机(Grid Search-SVM)和基于遗传算法的支持向量机(GA-SVM)进行模式识别。从分类结果上看,GA-SVM是一种高效,平行和综合的搜索算法,其自动控制搜索过程可以通过自适应确定最优解,即使在训练样本有限的情况下,该算法仍产生准确的识别结果并展现良好的收敛特性。THz-TDS技术与模式识别相结合的方法,在鉴别不同固相生物分子的种类方面具有可行性。4、针对传统生物医学方法在检测液相生物分子相互作用时会受到荧光剂干扰的问题,提出了采用THz-TDS技术进行无标记检测生物分子相互作用的方法;选取具有重要生物学意义的雌激素受体α抗体(AER-α)以及与它的特异性抗原雌激素受体α多肽片段(ERP-α)作为研究对象,测量了AER-α与ERP-α反应前后的太赫兹光谱,应用水化动力学角度分析两种生物分子相互作用的机制,并从介电性质变化方面进一步分析两种生物分子相互作用前后的介电损耗角变化。最后,与传统生物医学方法相比较,证明了THz-TDS技术在检测液相生物分子相互作用方面具有可行性和可靠性。5、针对于一些液相生物分子在常规条件下对太赫兹场响应不敏感的情况,提出使用开口谐振环(Split-ring resonator,SRR)结构来增强太赫兹场局域电磁响应,从而增强太赫兹光谱对液相生物分子的检测灵敏度的方案。实现对不同液相生物分子的检测。设计并制造了SRR结构,实际制造出来的SRR结构参数与理论仿真吻合较好;首先,利用SRR结构与THz-TDS相结合,得到了油酸,亚油酸,α-亚麻酸和γ-亚麻酸四种不同脂肪酸的太赫兹透射谱,从光谱信息实部和虚部成功区分出不同种类的脂肪酸;其次,基于SRR结构,获得了不同浓度的免疫球蛋白(Rabbit IgG)溶液太赫兹透射光谱,实验结果显示可以有效区分不同浓度的Rabbit IgG蛋白溶液,且最小检测浓度为0.001mg/ml。随后将不同浓度的Rabbit IgG蛋白与频率偏移进行了拟合,从水化动力学角度分析了不同浓度蛋白产生不同频率偏移量的原因。测量了Rabbit IgG+anti-Rabbit IgG(抗体)溶液组合以及Rabbit IgG+BSA(牛血清蛋白)溶液组合基于SRR结构的太赫兹透射光谱,通过比对谐振峰的频率偏移量的差异,成功无标记检测了两种蛋白是否发生相互作用。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：O441
【部分图文】：

生物分子,制作流程,固相,样本

吉林大学博士学位论文匀混合。在实际的压片过程中发现压片的厚特性（如孔隙度）。使用天然玛瑙研钵，如使生物分子样本与聚乙烯粉末充分接触，这孔隙，再将研磨后的混合物放在上海驰唐实器上使样本充分混合，保证样本均一性,如有限公司生产的 HY-12 粉末压片机进行压用性较强的手动液压型压片机，压片直径为吨），如图 2.1d 所示。

生物分子,液体样品,样本,硅片

图 2.2 制备液相生物分子样本所需的液体样品池(a)和移液枪(b 超材料结合液相生物分子样本制备技术料对电磁场具有良好的局域场增强特性，与生物分子之间可以产生材料结构对周围环境的介电变化比较敏感。因此，通过检测超材料环境的变化，来间接解析生物分子的介电常数、折射率等信息。是指在涂满光刻胶的晶圆（硅片）上盖上事先做好的光刻板，然后光刻板对晶圆进行一定时间的照射，其原理是利用紫外线使部分光于腐蚀。具体过程是把涂有光致抗蚀剂的基底层上的内容完全从掩来，将图形转移到基片上。料为两层结构，第一层为具有周期性结构金膜，第二层为衬底硅基本流程：1）衬底基片清洗：将裁剪好的硅片放入超声波清洗仪后先用无水乙醇清洗再用去离子水漂洗干净，再用高压氮气把硅片

磁控溅射镀膜,曝光机,材料

第 2 章基于太赫兹时域光谱系统的生物分子检测技术除表面的混合液后，再使用无水乙醇洗去光刻胶，再利用去吹干后即得到开口谐振环结构。测前，首先在超材料上表面粘贴一内径 15mm,厚度约为 100溶液用移液枪滴加在圆形区域内，这样在超材料表面就形成一膜，为了使测量结果更加准确，每次滴加的溶液体积都是 10的可靠性，要进行多次测量，在进行下一次测量时，要把已经，利用无水乙醇进行清洗后使用去离子水冲洗，然后再用高压超材料吹干后才能再进行溶液滴加，进行测量。为去除水分对整个测量过程都要在充满氮气的环境中进行测量。

【参考文献】