绿色荧光蛋白标记的人血管内皮生长因子165基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

发布时间：2017-11-03 10:05

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【摘要】：目的构建与鉴定携带绿色荧光蛋白标记的人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因的重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-GFP。方法将hVEGF165基因进行扩增,并同源重组入表达质粒pAV-MCMV-HA-P2A-GFP,转化入DH5a感受态细胞,得到的转化子经菌落聚合酶链反应(PCR)鉴定和测序鉴定后,通过Ad Max腺病毒包装系统转染HEK293细胞,进行病毒的包装和扩增。包装后镜下观察HEK293细胞,测定腺病毒滴度,Western blot检测重组腺病毒的表达。结果成功构建了重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-GFP,重组腺病毒转染的HEK293细胞出现了明显的细胞病变效应;获得重组腺病毒的滴度为1.106×10~8 IFU/mL;Western blot检测重组腺病毒表达在23 000左右。结论成功获得重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-GFP,为进一步研究基因治疗脓毒症/感染性休克奠定了实验基础。
【作者单位】： 南昌大学第四临床医学院临床医学系;南昌大学第四附属医院重症医学科;
【关键词】： 人血管内皮生长因子 腺病毒 载体构建
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81360296) 江西省卫生和计划生育委员会科技计划重大攻关计划(20155361)
【分类号】：R459.7;Q78
【正文快照】： 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是机体血管生成和促血管形成的重要因子。其中VEGF165是体内发挥作用的主要形式,具有促进血管内皮增殖和增加血管通透性的作用[1]。腺病毒(adenovirus)是目前最高效可靠的重组病毒表达系统之一,已被广泛应用于载体

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