刺激响应型阳离子脂质基因载体研究

发布时间：2017-03-18 11:02

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【摘要】：基因治疗为许多先天性遗传和后天获得性疾病的治疗提供了良好的应用前景,其关键在于高效、低毒的基因载体的合成。阳离子脂质体因其良好的生物兼容性、无免疫原性以及设计合成的便利性使其成为最有研究前景的基因载体。通过研究脂质体的载体结构与转染效率、细胞毒性之间的关系,对于构建理想的脂质基因载体具有重要意义。本文第一章概述了阳离子脂质的研究进展以及基因传递的细胞内外障碍及其解决方法。第二章,我们设计合成了两个含有生育酚疏水基团的还原敏感型氨基酸阳离子脂质2-4a和2-4b。这两个脂质形成的脂质体表现出了较强的DNA结合能力,可包裹压缩DNA形成稳定的复合物。以组氨酸为头部的脂质体2-4a的转染效率高于赖氨酸为头部的脂质2-4b,这可能与阳离子脂质2-4a较弱的DNA结合能力有关。同时,阳离子脂质2-4a的转染效率与商品化试剂Lipofectamine 2000相当。此外,脂质体2-4a有较好的血清相容性,10%血清条件下的转染效率为聚乙烯亚胺bPEI-25K的4.3倍。第三章,在前期的基础上,设计合成了基于二肽亲水头部的还原敏感型阳离子脂质体。这些脂质都表现出了不同的DNA结合能力,且具有良好的生物兼容性。阳离子脂质3-2f在最优条件下转染效率为聚乙烯亚胺bPEI 25k的100倍。第四章,我们设计合成了一系列酯酶响应的电荷转换型氨基酸阳离子脂质。结果表明亲水头部对转染效率有较大的影响。以苯丙氨基酸为头部的阳离子脂质4-4c的转染效率最高,其在10%血清存在下的转染效率为聚乙烯亚胺bPEI 25k的2.1倍。
【关键词】：非病毒载体 阳离子脂质 刺激响应 氨基酸
【学位授予单位】：西南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R450
【目录】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-8
• 第一章 阳离子脂质作为非病毒载体研究进展8-20
• 1.1 基因治疗及基因载体简介8-9
• 1.2 阳离子脂质基因载体9-13
• 1.2.1 脂质体简介9
• 1.2.2 阳离子脂质分类9-13
• 1.3 阳离子脂质基因载体传递的一般过程13
• 1.4 基因转染过程中的各种障碍13-14
• 1.4.1 细胞外的障碍13
• 1.4.2 细胞内的障碍13-14
• 1.5 刺激响应型阳离子脂质研究14-19
• 1.5.1 pH-响应的阳离子脂质研究14-16
• 1.5.2 酶响应型阳离子脂质研究16-17
• 1.5.3 还原响应型阳离子脂质研究17-18
• 1.5.4 多重刺激型阳离子脂质研究18-19
• 1.6 论文的研究思路和主要内容19-20
• 第二章 基于氨基酸头部的还原敏感阳离子脂质20-42
• 2.1 引言20
• 2.2 结果与讨论20-33
• 2.2.1 目标阳离子脂质的合成20-21
• 2.2.2 酸碱滴定实验21-22
• 2.2.3 脂质体与DNA的作用22-26
• 2.2.4 细胞毒性实验26-27
• 2.2.5 体外基因转染实验27-33
• 2.3 小结33
• 2.4 实验部分33-42
• 2.4.1 合成实验33-37
• 2.4.2 目标阳离子脂质的性质实验37-42
• 第三章 氨基酸二肽阳离子脂质的合成及基因转染研究42-65
• 3.1 引言42-43
• 3.2 结果与讨论43-57
• 3.2.1 目标阳离子脂质的合成43-45
• 3.2.2 脂质体与DNA的作用以及脂质体/DNA复合物的特性45-48
• 3.2.3 细胞毒性实验48-50
• 3.2.4 体外基因转染实验50-57
• 3.3 小结57
• 3.4 实验部分57-65
• 3.4.1 合成实验57-63
• 3.4.2 目标阳离子脂质的性质实验63-65
• 第四章 电荷转换型阳离子脂质的合成及基因转染研究65-83
• 4.1 引言65-66
• 4.2 结果与讨论66-76
• 4.2.1 目标阳离子脂质的合成66-68
• 4.2.2 脂质体与DNA的作用以及脂质体/DNA复合物的特性68-71
• 4.2.3 细胞毒性实验71
• 4.2.4 体外基因转染实验71-75
• 4.2.5 阳离子脂质内吞和胞内行为75-76
• 4.3 小结76
• 4.4 实验部分76-83
• 4.4.1 合成实验76-82
• 4.4.2 目标阳离子脂质的性质实验82-83
• 总结83-84
• 参考文献84-89
• 攻读学位期间发表论文情况89-90
• 致谢90-91

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4 要e

本文编号：254321