阿奇霉素耐药淋球菌菌株的耐药机制分析和分子流行病学特征

发布时间：2020-02-25 19:29

【摘要】：目的探讨阿奇霉素耐药淋球菌菌株的分子流行病学特征,分析耐阿奇霉素淋球菌的耐药机制。方法对36株耐阿奇霉素淋球菌[最小抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L]的核糖体23SrRNA、mtrR基因及核糖体蛋白L4/L22基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,比较耐药基因突变在中度耐药组(MIC 1~64 mg/L)和高度耐药组(MIC≥256 mg/L)间的差异。采用NG-MAST对基因序列进行分型,获得阿奇霉素耐药菌株的基因型别及分布特征。结果高度耐药淋球菌菌株核糖体23SrRNA的4个等位基因均有A2143G的突变,中度耐药菌株中有3株(8 mg/L≤MIC≤32mg/L)核糖体23SrRNA 4个等位基因为C2599T突变。36株阿奇霉素耐药菌株中鉴定出28个不同的序列型别(ST),其中16个为新发现的ST,2个未分型。结论淋球菌核糖体23SrRNA基因不同位点突变可能与阿奇霉素不同程度的耐药相关,A2143G突变可能导致高度耐药,C2599T可能与中度耐药有关,mtrR基因G45D的突变可能参与阿奇霉素耐药。通过NG-MAST分型显示阿奇耐药菌株的基因型具有多样性,且覆盖范围也较为广泛;经过系统进化树推断por581基因型有较大可能影响阿奇霉素高度耐药。
【图文】：

淋球菌,标准序列,氨基酸序列,耐药菌株

图1淋球菌分离株的氨基酸序列与23SrＲNA标准序列比对示例图差异无统计学意义。本研究未检出mtrＲ编码区的双重位点突变，如A39T/H105Y或G45D/H105Y。2．2基因发育树36株阿奇霉素耐药菌株中鉴定出28个不同的序列型别(sequencetype，，ST)，其中16个为新发现的ST，2个未分型，ST1866为本地区阿奇霉素耐药菌株较为常见的基因型。图2展示了28个不同类型的ST之间的进化关系。通过系统发育树显示，在合肥地区阿奇耐药菌株的基因型具有很强的多样性，且覆盖的基因范围比较广泛。对于发育树中的阿奇耐药菌株根据其相似性划分出了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个群组。第I组中有7个不同类型的阿奇耐药菌株，该组中除了ST13129以外，其他的ST菌株类型均有相同的tbpB33。第Ⅱ组中含有5个不同类型的阿奇耐药菌株，其中ST13131与ST13138相似性较高，拥有相同的tbpB566。第Ⅲ组中包含了8个不同类型的阿奇耐药菌株，其中除了ST12198与ST12642以外，其余的ST都有相同的tbpB4。该组中2个高度耐药的ST12642和ST1055有相同的por581，巧合的是，全国流行的高度耐药菌株ST1866也有着相同的por581，或许这预示着por581基因型与阿奇高度耐药有着一定的内部联系。另外值得注意的是，在群组Ⅲ中，ST12204、ST13130、ST131363个类型的菌株具有非常高的相似性，仅有1～2个碱基对的差异，这在一定程度上印证了阿奇霉素耐药的稳定性。3讨论大环内酯类抗生素的作用机制是与细菌核糖体50S亚基的23S核糖体的特殊靶位及某种核糖体的蛋白质结合，阻断转肽酶作用和干扰mＲNA翻译，发挥抑菌作用。目前研究［6］表明，淋球菌对阿奇霉素敏感性下降或耐药机制主要涉及药物作用靶位的改变(如核糖体23SrＲNA基因的特定位点突变)和药物外排的增加(如mtrＲ基因突变)等，23SrＲNA基因

系统发育树,阿奇霉素,耐药菌株

图2系统发育树突变，而仅有50%阿奇霉素中低度耐药菌株存在G45D突变，提示该突变可能在阿奇霉素高度耐药中发挥较重要的作用。本研究通过对阿奇霉素耐药菌株进行NG-MAST分型显示，36株阿奇霉素耐药菌株共具有28个不同的ST型别，其中16个为新发现的型别。另外针对28种不同ST型别的系统发育树显示，合肥地区阿奇耐药菌株的基因型不仅具有多样性，其基因覆盖范围也较为广泛，说明该地区人群流动性较大。另外本研究显示，在阿奇霉素耐药菌株中比较常见的tbpB基因型有tbpB33、tbpB566和tbpB4，提示这3种基因型可能与阿奇霉素耐药性存在一定联系。值得注意的是，本研究显示多个阿奇霉素耐药菌株有相同的por581，其中包括全国流行较广的ST1866菌株，可以推断por581基因型有较大可能影响阿奇霉素高度耐药。目前国内阿奇霉素耐药情况相当严重，且高度阿奇霉素耐药菌株占有较大比例，因此不再提倡把阿奇霉素作为治疗淋病及其他一些传染病的一线药物。但是对于一些头孢、青霉素过敏的患者，阿奇霉安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Mar;52(3)·363·

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