多色熔解曲线分析技术用于结核分枝杆菌二线药物耐药突变检测研究

发布时间：2020-03-19 08:42

【摘要】：结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染性疾病。近年来,耐多药结核(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)患者以及广泛性耐药结核(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)患者案例逐渐增加,其中 XDR-TB患者治疗时间更长,治愈难度更大。此外,临床上结核菌异质性耐药的情况也越来越多被发现,增加了分子诊断的难度。目前,对于耐药结核仍然缺少临床适用的快速、高灵敏的诊断方法。为了实现XDR-TB的早期诊断,有效指导临床医生用药,本研究基于多色熔解曲线分析技术,建立结核分枝杆菌二线药物耐药突变检测体系,包括氟喹诺酮类药物耐药检测体系以及注射类二线药物耐药检测体系。第一章,绪论。主要介绍结核病概况,结核病临床诊断技术,结核分枝杆菌异质性耐药以及多色熔解曲线分析技术。第二章,氟喹诺酮类药物耐药突变检测体系的建立。为了解决对结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药突变类型识别区分的问题,以及实现低水平异质性耐药突变检测,辅助医生早诊断、精确用药,本研究基于多色熔解曲线分析技术,建立了单重双色检测体系,FQ-MMCA体系。体系针对氟喹诺酮类药物gyrA基因的耐药决定区设计探针,实现异质性突变检测能力达5%-20%突变水平;利用781份临床分离株对体系的临床诊断性能进行评价,结果显示,FQ-MMCA体系的敏感性为92.3%,特异性为97.6%。第三章,注射类二线药物耐药检测体系的建立。基于多色熔解曲线技术,本研究建立单管双重四色体系,SL-DeepMelt体系,实现对注射类二线药物耐药基因rrs基因1401、1402和1484位点以及eis启动子区-10、-13、-14以及-37位点设计探针进行检测。本体系实现对最高突变频率位点rrs1401 AG异质性检出能力达1%;本研究利用488份临床分离株对体系的临床诊断性能进行评价,结果显示,SL-DeepMelt体系的敏感性为90.5%,特异性为97.8%。本体系的优势在于单管实现多个位点的检测,大大降低临床检测操作复杂性;同时SL-DeepMelt体系实现低水平异质性耐药突变检测,有利于结核分枝杆菌注射类二线药物耐药的早期快速诊断。
【图文】：

统计图,全球,耐多药结核病,耐多药

是最有效的一线结核药），，其中出现４９万耐多药结核病（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋ＴＢ，逡逑ＭＤＲ）案例，并且将近一半（４７％）的案例在印度、中国和俄罗斯联邦三个国家。逡逑图１－３所示为２０１６年的新发耐多药患者统计图，由图可知，中国、印度和俄罗逡逑斯联邦国的结核病耐药情况较为严重，总体看来占据全球的耐多药患者的逡逑４７％［３］。逡逑截至２０１６年底，全世界１２３个国家报告了广泛耐药结核病（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ邋ｄｒｕｇ－逡逑ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋ＴＢ邋，邋ＸＤＲ－ＴＢ）邋病例。邋所谓的邋ＸＤＲ－ＴＢ，邋即在邋ＭＤＲ－ＴＢ邋的基础上，对至少一逡逑种氟唾诺酮类以及一种二线注射类药物耐药。共９１个国家和５个地区报告了有逡逑代表性的数据，包括连续监测数据或关于耐多药结核病病例中广泛耐药结核病逡逑７逡逑

统计图,耐多药,利福平,患者

逡逑Ｎｏｔ邋ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ逡逑图１－２：邋２０１６年全球ＴＢ死亡率统计图逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２：邋Ｅｓｔｉｍａｔｅｄ邋ＴＢ邋ｍｏｒｔａｌｉｔｙ邋ｒａｔｅｓ邋ｉｎ邋２０１６．逡逑１．２结核病耐药情况逡逑结核病是一种很严重的全球性疾病，随着耐药结核菌以及艾滋病病毒的出逡逑现，结核病控制成为了亟待解决的一大问题。耐药性是指由于某些原因导致结逡逑核分枝杆菌对原敏感的药物出现的表型或者遗传型敏感性下降的现象。根据逡逑ＷＨＯ结核病报告，２０１６年发生６０万耐利福平（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ）的新发病例（利福平逡逑是最有效的一线结核药），其中出现４９万耐多药结核病（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋ＴＢ，逡逑ＭＤＲ）案例，并且将近一半（４７％）的案例在印度、中国和俄罗斯联邦三个国家。逡逑图１－３所示为２０１６年的新发耐多药患者统计图，由图可知，中国、印度和俄罗逡逑斯联邦国的结核病耐药情况较为严重，总体看来占据全球的耐多药患者的逡逑４７％［３］。逡逑截至２０１６年底
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5

【参考文献】