关于亚抑制浓度庆大霉素可通过抑制大肠杆菌丛动性降低细菌毒力的研究

发布时间：2020-03-23 22:16

【摘要】：目的:研究前发现,庆大霉素的亚抑制浓度预处理可以抑制大肠杆菌标准菌株的丛动能力,该机制可能与抑制琥珀酸脱氢酶(SDH)表达,延胡索酸产生减少相关,提示庆大霉素在治疗大肠杆菌感染有其自身优势。本研究通过对临床分离菌株及标准菌株分别进行庆大霉素预处理,结合体内外实验,及荧光实时定量PCR验证亚抑制浓度庆大霉素可降低细菌毒力及其相关机制。方法:1利用体外实验验证庆大霉素对临床菌株的丛动性抑制作用,用肉汤稀释法测定临床菌株的最低抑菌浓度(MIC),进而使用1/2MIC的庆大霉素处理菌株,未经处理的作为对照组,两组各取2ul菌液接种于丛动(swarm)平板及游动(swim)平板,在室温下孵育,测量菌落直径。2通过体内实验进一步验证1/2MIC的庆大霉素可以减低细菌毒力。3大肠杆菌的运动性主要靠鞭毛,参与鞭毛运动的基因目前已报道的有motA、motB等,fliA作为二级调控系统亦参与鞭毛合成。通过RT-PCR观察药物处理前后fliA的基因表达量间接推断其与降低毒力机制相关,为后续探讨SDH-延胡索酸-fliA信号通路在庆大霉素抑制大肠杆菌丛动性降低毒力的作用机制提供理论依据。结果:1体外验证证实,亚抑制浓度的庆大霉素处理后临床菌株的丛动性明显抑制。共进行了三次实验,每次实验重复三次。2体内试验,购买20g左右昆明雄性小鼠,按标准菌株ATCC25922和临床菌株968(分离于尿液标本)分组,其中药物处理的为实验组,未经处理的为对照组,进行腹腔注射小鼠,结果发现每组(n=10)实验组和对照组注射0.5×10~8 cfu、0.5×10~7 cfu的大肠杆菌后,经1/2MIC庆大霉素预处理后的大肠杆菌毒力明显下降,小鼠48hr内死亡率10~8 cfu/ml下,标准菌株由100%降至50%,临床菌株由100%下降至70%;10~7 cfu/ml下,标准菌株由50%降至0%,临床菌株由30%下降至0%,结果表明,在亚抑制浓度的庆大霉素作用下,大肠杆菌的毒力较前减低。因试验时间有限,后期可继续扩增试验动物数量进一步验证。3 RT-PCR,庆大霉素预处理的为实验组,庆大霉素与延胡索酸共同处理的也为实验组,不做处理的为对照组,通过实时荧光定量PCR,得出单用庆大霉素处理的fliA表达量下调,庆大霉素与延胡索酸同时处理的因延胡索酸浓度fliA表达量有所不同,PCR结果为我们提出的假设:庆大霉素抑制SDH转录,导致延胡索酸合成减少,延胡索酸作为细胞内信号分子引发鞭毛相关转录因子fliA(σ28)的下调,进而导致下游部分鞭毛基因下调,最终使得大肠杆菌丛动性下降。结论:1亚抑制浓度庆大霉素对大肠杆菌具有抑制其丛动性进而降低毒力的作用。2亚抑制浓度庆大霉素可通过降低细菌鞭毛相关基因表达量进而抑制其运动性。
【图文】：

68swarm运动

统计学意义,运动实验

1.3.3 通过实验得到运动实验结果图1-2 ATCC 25922 swarm运动图1-3 ATCC 25922 swim运（P＜0.05，具有显著统计学意义）（P＜0.05，具有显著统计学意义
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.5

【参考文献】