核酸序列依赖扩增技术检测隐球菌感染的实验研究

发布时间：2020-03-28 03:57

【摘要】：目的:隐球菌病作为一种严重的侵袭性真菌感染性疾病,目前临床上缺乏灵敏度高、特异性强且快速准确的诊断方法使患者能得到早期精准治疗,改善预后。本研究拟建立一种核酸序列依赖扩增(Nucleic acid sequence-based amplification NASBA)技术来检测隐球菌,通过对比NASBA、PCR方法、荚膜多糖抗原胶体金法检测同批次临床标本的性能参数,以此验证NASBA方法的临床应用价值。方法:首先设计一对具有隐球菌属特异性的引物,构建NASBA扩增隐球菌RNA的方法并评价该方法的灵敏度和特异性。根据EORTC/MSG所定义的诊断标准收集隐球菌病阳性病例和非隐球菌病阴性病例,运用隐球菌荚膜多糖抗原检测(胶体金法)、普通PCR及本研究建立的NASBA方法分别对所收集病例标本进行检测,比较三种诊断方法的性能指标以评估出最佳诊断策略。结果:本研究建立的NASBA方法检测隐球菌,其灵敏度高,达到10cfu/ml,特异性也非常良好。NASBA、荚膜多糖抗原胶体金法及PCR灵敏度分别是87.5%(95%CI,66.53-96.71%)、100%(95%CI,82.83-100%)、66.67%((95%CI,44.69-83.57%),特异性分别是94.59%(95%CI,80.47-99.06%)、81.08%(95%CI,64.29-91.44%)、78.37%(95%CI,61.34-81.58%)。结论:NASBA方法具有高效、准确、简便等优势,能够满足临床诊断隐球菌感染的需求。整个实验过程无需特殊仪器,适合在普通的临床实验室开展,有望成为新的隐球菌感染的常规诊断方法。
【图文】：

电泳图,电泳,新型隐球菌,金黄色葡萄球

图 1.1 NASBA 扩增产物电泳结果Results of electrophoresis of NASBA amplificationL1000bp Marker; 1:新型隐球菌（FY 226）；2：阴曲霉、串珠镰刀菌、金黄色葡萄球、铜绿假近平滑念珠菌）和新型隐球菌同时进行 N的 RNA 扩增产物在 229bp 处出现了目的条带（图 1.2），证明本研究建立的方法特异性理

电泳图,菌种,电泳,近平滑念珠菌

图 1.2 不同菌种 NASBA 扩增后电泳结果ectrophoresis results after amplification of different strain marker；1-2：新型隐球菌（FY 226）；3：烟曲霉 (CMCC-3629）；5：白色念珠菌 (ATCC 64548)；6：近平滑念珠菌 (ATCC 29213)； 8：铜绿假单胞菌 (ATCC 27853) ；9：析增 106cfu/ml、 105cfu/ml 、104cfu/ml 浓度隐球菌其倍比稀释后的相当于孢子浓度分别为 103cfu/ml、u/ml 的 RNA，经电泳方法检测结果发现 RNA 对应条带，推断该方法灵敏度可达 10 cfu/ml（图 1.3）。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R519;R440

【参考文献】