耐碳青霉烯类MDR-AB的体外联合药敏研究及金属酶基因检测

发布时间：2020-04-08 15:09

【摘要】：目的探讨锦州医科大学附属第一医院35株多重耐药鲍曼不动杆菌(Multi-drug resistant acinetobacter baumanii,MDR-AB)耐药情况,检测MDR-AB金属β-内酰胺酶(MBL)基因,探究抗生素联合应用对MDR-AB的体外活性。方法收集锦州医科大学附属第一医院2016年8月至2017年3月期间各科室耐碳青霉烯类的MDR-AB。微量肉汤稀释法测定35株MDR-AB对抗生素的耐药性。聚合酶链式反应(PCR)检测被测菌株MBL基因携带情况,将PCR阳性产物进行测序确定基因型。棋盘法测定抗生素联用对MDR-AB的MIC值,计算FIC指数,用统计学方法分析。结果1、MDR-AB在ICU检出率最高,其次为神经外科,分别占74.3%(26/35)和17.1%(6/35)。2、实验菌株对头孢哌酮/舒巴坦(CFS)、哌拉西林/舒巴坦(SPI)、氨苄西林/舒巴坦(SAM)、美罗培南(MER)、比阿培南(BPM)、亚胺培南(IPM)、磷霉素(FOS)、硫酸依替米星(ETS)的耐药率达100%,对利福平(RIF)耐药率为31.4%、左氧氟沙星(LVX)为80.0%、舒巴坦(SUL)为91.4%、替加环素(TIG)为71.4%、多粘菌素B(PMB)为42.9%、阿米卡星(KAN)为94.3%、庆大霉素(GEN)为94.3%和米诺环素(MIN)为5.7%。3、用特异引物对NDM-1、IMP-1、VIM-1、VIM-2、GIM和SPM 6种金属β-内酰胺酶基因进行扩增后电泳,其中有26株菌均在263bp左右出现阳性条带,提示上述菌株可能携带了IMP-1基因,阳性率为74.3%(26/35);13株在285bp左右出现阳性条带,提示上述菌株可能携带了VIM-2基因,阳性率为37.1%(13/35);其中11株同时携带IMP-1和VIM-2基因。4、选取PCR阳性产物送至大连宝生生物科技有限公司纯化并测序,结果和GeneBank上报道的已知IMP-1和VIM-2基因比对,同源性为99%,证实为IMP-1和VIM-2基因。5、在以SUL、CFS、TIG为基础的各药物联用时,对实验菌株主要表现为协同、部分协同和相加作用,无拮抗现象。其中,与MER联用的协同率较高(P0.05)。结论1、本实验的35株MDR-AB中,多携带blaIMP-1、blaVIM-2基因,在介导碳青霉烯类抗生素耐药中起一定作用。2、抗生素联合应用对实验的35株MDR-AB主要表现为协同及部分协同作用,无拮抗作用。头孢哌酮舒巴坦在治疗MDR-AB时,舒巴坦起主要作用;与比阿培南和亚胺培南相比,美罗培南分别与舒巴坦、头孢哌酮舒巴坦、替加环素联合,对MDR-AB具有良好的体外抗菌活性。
【图文】：

电泳图,菌株,PCR扩增产物,电泳图

取 IMP-1 和 VIM-2 基因所有阳性产物纯化并测序，结果和 GeneBank 上报道的已知基因序列比对，，证实为 IMP-1 和 VIM-2 基因，同源性为 99%。图1 部分菌株IMP-1基因PCR扩增产物电泳图注：M：DL2000 DNA MARK；N：阴性对照；1-6孔为blaIMP-1基因扩增产物阳性的菌株图2 部分菌株VIM-2基因PCR扩增产物电泳图注：M：DL2000 DNA MARK；N：阴性对照；2-13孔为blaVIM-2基因扩增产物阳性的菌株；1、14、15孔为blaVIM2基因扩增产物阴性的菌株

电泳图,菌株,PCR扩增产物,电泳图

图1 部分菌株IMP-1基因PCR扩增产物电泳图注：M：DL2000 DNA MARK；N：阴性对照；1-6孔为blaIMP-1基因扩增产物阳性的菌株图2 部分菌株VIM-2基因PCR扩增产物电泳图注：M：DL2000 DNA MARK；N：阴性对照；2-13孔为blaVIM-2基因扩增产物阳性的菌株；1、14、15孔为blaVIM2基因扩增产物阴性的菌株
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5;R440

【参考文献】