miRNA-320b在急性下肢深静脉血栓形成患者血浆中的表达及诊断价值研究

发布时间：2020-04-12 00:53

【摘要】：背景与目的深静脉血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)是指血液在深静脉内非正常的凝结,好发于下肢。血栓形成部位的栓子脱落以后随血液循环入肺,可导致肺栓塞(pulmonary embolism,PE),严重威胁患者的生命。深静脉血栓形成后综合征(post-thrombotic syndrome,PTS)是DVT患者最常见的长期并发症,严重影响患者的生活质量。静脉造影是诊断下肢DVT的金标准,准确性高,但是属于有创检查,而且部分病人对造影剂过敏。D-二聚体(D-dimer)在临床上广泛用于DVT的排除诊断,敏感性高,但是特异性低。P-选择素(P-selectin)在诊断下肢DVT时,具有较高的特异性。但是不同实验室之间,P-选择素尚无统一的检测方法和临界值。因此,仍需进一步探索新的诊断DVT的分子标志物。循环miRNA在多种疾病的进展、诊断及预后等方面具有重要价值。研究证实miRNA-320b在静脉血栓性疾病中存在差异表达,但是在急性下肢DVT中的具体表达情况尚不清楚。因此,本课题分析miRNA-320b在急性下肢DVT、PTS和健康对照人群中的表达,并结合D-二聚体和P-选择素分析它们的诊断价值,以期为DVT的诊断提供更多的信息。方法1.研究对象:分别收集急性下肢DVT患者和PTS患者的血浆标本,作为DVT组和PTS组。同时期内收集与患者年龄、性别相匹配的体检者血浆标本,作为对照组。2.标本的收集与保存:于入院后第二天早晨抽取DVT组、PTS组及对照组空腹外周血标本。离心分离血浆后备用。3.血浆miRNA相对表达量检测:采用qRT-PCR方法检测各血浆标本中miRNA-320b及内参基因miRNA-16的相对表达量。4.D-二聚体水平的检测:D-二聚体浓度采用胶乳增强免疫比浊法测定。5.P-选择素水平的检测:P-选择素的水平运用ELISA方法测定。6.miRNA-320b靶基因预测:应用靶基因预测软件预测miRNA-320b可能调控的靶基因,并对预测的靶基因进行GO分析和KEGG通路富集分析。7.统计学分析:应用SPSS 21.0统计软件进行统计学分析。正态定量指标采用均数±标准差表示,非正态定量指标采用中位数和四分位数间距表示;定性指标采用频数或百分比表示。三组定量资料之间的比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),定性资料采用卡方检验。相关性分析采用Spearman相关。绘制受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线并计算曲线下面积(area under the curve,AUC)、敏感性和特异性,用来评估指标的诊断价值。所有分析均采用双侧检验,P0.05时认为差异具有统计学意义。结果1.miRNA-320b在急性下肢DVT患者血浆中的相对表达量显著高于对照组,差异具有统计学意义(P0.001),变化倍数是1.79倍。miRNA-320b在PTS患者血浆中的相对表达量与对照组相比差异无统计学意义(P=0.091)。2.与对照组相比,D-二聚体浓度在急性下肢DVT患者血浆中显著升高,差异具有统计学意义(P0.001)。而在PTS组中,D-二聚体浓度与对照组的差异无统计学意义(P=0.139)。3.与对照组相比,P-选择素浓度在急性下肢DVT患者血浆中显著升高,差异具有统计学意义(P0.001)。而在PTS组中,P-选择素浓度与对照组的差异无统计学意义(P=0.118)。4.在急性下肢DVT患者血浆中,miRNA-320b相对表达量与D-二聚体水平呈正相关(r=0.358,P=0.001);miRNA-320b相对表达量与P-选择素水平之间的相关性无统计学意义(r=-0.072,P=0.524)。5.ROC分析结果显示,血浆miRNA-320b、D-二聚体和P-选择素诊断急性下肢DVT的AUC分别为0.787(95%CI:0.710-0.864)、0.882(95%CI:0.821-0.943)和0.825(95%CI:0.754-0.895)。miRNA-320b与D-二聚体联合诊断的AUC为0.886(95%CI:0.828-0.944);mi RNA-320b与P-选择素联合诊断的AUC为0.904(95%CI:0.853-0.954);P-选择素与D-二聚体联合诊断的AUC为0.935(95%CI:0.893-0.978);miRNA-320b、D-二聚体和P-选择素联合诊断的AUC为0.953(95%CI:0.920-0.986)。6.生物信息学分析结果显示,miRNA-320b的预测靶基因的功能包括血管生成、血管发育和血管形态等生物学过程;富集通路包括PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路以及细胞因子-细胞因子受体相互作用等。结论1.miRNA-320b在急性下肢DVT患者血浆中的相对表达量显著升高,可能成为诊断急性下肢DVT潜在的生物标志物。2.D-二聚体和P-选择素水平在急性下肢DVT患者血浆中显著升高,而且血浆miRNA-320b的相对表达量与D-二聚体水平呈正相关。3.miRNA-320b联合D-二聚体、P-选择素可提高急性下肢DVT诊断的准确性,有助于DVT的早期诊断。
【图文】：

ROC曲线,下肢,血浆,ROC曲线

0.211（0.156，0.368），显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.001）。与对照组相比，miRNA-320b 在急性下肢 DVT 患者血浆中的变化倍数是 1.79 倍（2-ΔΔCp）。研究证实 miRNA 倍数变化在 1.5 倍以上就可能对细胞的生物学产生重大的影响[22]。miRNA-320b 在 PTS 患者血浆中的相对表量为 0.151（0.088，0.272），与对照组相比，差异无统计学意义（P = 0.091）（图 1A）。由此说明，血浆 miRNA-320b 可能有助于急性下肢 DVT 的诊断，而对于 DVT 慢性并发症PTS 的价值尚有待进一步探索。2.2 血浆 miRNA-320b 对急性下肢 DVT 患者的诊断价值对 miRNA-320b 诊断急性下肢 DVT 进行 ROC 分析、计算 AUC，并使用最大约登指数（Youden index）法确定临界值（cutoff 值）。结果显示，血浆miRNA-320b 诊断急性下肢 DVT 的 AUC 为 0.787（95%CI：0.710-0.864）；当miRNA-320b 的相对表达量 cutoff 值取 0.172 时，血浆 miRNA-320b 诊断急性下肢 DVT 的敏感性和特异性分别为 70.0%和 78.0%（图 1B），表明 miRNA-320b在一定程度上可以区分开急性下肢 DVT 患者和健康人群。

ROC曲线,下肢,血浆,二聚体

3 D-二聚体在急性下肢 DVT 和 PTS 患者血浆中的表达情况D-二聚体在对照组血浆中的浓度为 0.349（0.112，，0.752）mg/L。D-二聚体在急性下肢 DVT 患者血浆中的浓度为 1.846（0.911，3.417）mg/L，显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.001）。D-二聚体在 PTS 患者血浆中的浓度为0.547（0.172，1.014）mg/L，与对照组相比，差异无统计学意义（P = 0.139）（图2A）。进一步分析血浆 D-二聚体对于急性下肢 DVT 患者的诊断价值，ROC 结果显示 AUC 为 0.882（95%CI：0.821-0.943）；当 D-二聚体的水平 cutoff 值取 0.508mg/L 时，D-二聚体诊断急性下肢 DVT 的敏感性和特异性分别为 95.0%和 66.0%（图 2B）。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.6;R440

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