梅毒患者与梅毒生物学假阳性人群抗心磷脂抗体的异质性及凝血功能相关性研究

发布时间：2020-04-30 19:03

【摘要】：目的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)存在beta 2-糖蛋白Ⅰ(β2-GPⅠ)依赖型与β2-GPⅠ非依赖型两种性质类型。前者主要存在于抗磷脂抗体综合征(antiphospholipid antibody syndrome,APS)等自身免疫性疾病患者中,且可导致患者出现动/静脉血栓形成和血小板减少等凝血功能异常表现;而β2-GPⅠ非依赖型ACA则主要存在于感染性疾病患者中,且与上述临床表现无关。另外研究发现某些感染性疾病患者可能存在凝血功能障碍,而梅毒患者的凝血功能未见报道。而近来报道感染性疾病可能也存在β2-GPⅠ依赖型ACA。梅毒患者与梅毒生物学假阳性(biological false-positive,BFP)人群血清中均存在梅毒非特异性抗体阳性,ACA作为梅毒非特异性抗体的主要组分,但其β2-GPⅠ依赖性质和凝血功能仍有待进一步明确。本研究重点明确梅毒患者与BFP人群中ACA的异质性,同时探讨其与凝血功能的相关性。方法共纳入675例患者(包括梅毒患者465例,BFP人群146例,APS患者64例)以及选取新西兰雄兔8只。使用化学发光试验方法检测实验人群的血清β2-GPⅠ依赖型ACA IgA/IgG/IgM和抗β2-GPI IgA/IgG/IgM抗体以及活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)、纤维蛋白原浓度(fibrinogen concentration,FIB)和血小板计数等相关常规凝血功能指标;使用自行构建ELISA方法检测实验兔血清β2-GPI依赖型ACA,同时使用性病研究实验室试验(venereal disease research laboratory,VDRL)检测实验兔血清梅毒非特异性抗体情况。结果BFP人群与APS患者血清β2-GPⅠ依赖型ACA和抗β2-GPⅠ抗体的阳性率均高于梅毒患者,差异有统计学意义(BFP:22.60%和28.77%,APS:32.81%和32.81%,梅毒:3.87%和1.08%;P0.001);而BFP人群与APS患者血清自免抗体阳性率无统计学差异(P=0.119;P=0.556)。梅毒患者与BFP人群血清β2-GPⅠ依赖型ACA浓度水平和阳性率均与快速血浆反应素试验(rapid plasma regain,RPR)滴度均无统计学相关性(P0.05)。梅毒患者血清β2-GPI依赖型ACA和抗β2-GPⅠ抗体的主要亚型均为IgM;而BFP人群和APS患者则以IgG亚型为主,且其IgA亚型抗体也有较高的检出率。本研究还发现与梅毒患者相比,BFP人群和APS患者的APTT(P0.001)、PT(P0.001)延长,FIB降低(P=0.022),血小板计数减少(P0.001)。与自身免疫性抗体阴性的各组人群相比,自身免疫性抗体阳性的梅毒患者、BFP人群与APS患者的APTT均有延长(P0.05)。另外,对实验兔免疫偶联牛血清白蛋白的心磷脂抗原后可诱导其产生β2-GPⅠ依赖型ACA,并可导致部分实验兔的VDRL检测结果呈阳性。结论梅毒患者和BFP人群的ACA存在异质性,梅毒患者的ACA为β2-GPⅠ非依赖型,而BFP人群存在明显比例的阳性β2-GPⅠ依赖型ACA,且其阳性率接近于阳性对照的APS患者,同时推测β2-GPⅠ依赖型ACA可能是导致梅毒生物学假阳性现象的原因之一。另外,β2-GPⅠ依赖型ACA与梅毒非特异性抗体检测的一致性差,β2-GPⅠ依赖型ACA浓度和阳性率与梅毒非特异性抗体滴度均无统计学相关性,提示β2-GPⅠ依赖型ACA与梅毒非特异性抗体检测方法所测的ACA是不同的。凝血功能分析发现与梅毒患者相比,BFP人群更易出现凝血功能障碍倾向,且自身免疫性抗体可能通过内源性途径影响机体的凝血功能。
【图文】：

研究对象,梅毒患者,亚组,患者

图 1 研究对象的选取Figure 1 The flow of participants from enrollment to analysisAbbreviations: RPR, rapid plasma reagin; TPPA, Treponemal pallidum particle agglutination;APS, antiphospholipid antibody syndrome; BFP, biological false-positive; Neg, negative.（1）梅毒患者2016 年 1 月至 2017 年 12 月，共有 85,186 例就诊者进行梅毒血清学 RPR和/或 TPPA 筛查，其中有 48,754 例就诊者同时检测 RPR 和 TPPA 项目以明确其 T. pallidum 感染状况，确诊的梅毒感染患者共 4,604 例。根据血清学检测结果，，本研究共纳入不同 RPR 滴度的梅毒患者 465 例，包括随机抽取的 RPR 阴性～RPR 1:128 各亚组患者各 50 例（此 RPR 滴度亚组的病例数均大于 50 例）以及 RPR 1:256 的患者 15 例（该 RPR 滴度亚组患者数量少于 50 例，将符合标准的患者全部纳入）。当纳入的梅毒患者存在多次

动物实验,操作流程,心磷脂

2.2 心磷脂免疫动物模型构建将 8 只新西兰雄兔按体重随机分成两组，每组 4 只，分别标记 1、2、3、4 号。实验前采集每只实验兔的耳中动脉血 1mL 以获得待检血清，分别进行以下各实验方法的基线空白值检测。分别对两组实验兔进行皮下免疫接种 1:1 心磷脂抗原（cardiolipin，CL）/完全佐剂和 1:1 偶联牛血清白蛋白的心磷脂抗原（cardiolipin-bovine serumalbumin，CL-BSA）/完全佐剂，150μg/只，并将两组实验兔分别命名为 CL 组与 CL-BSA 组。然后在首次免疫后的第 14 天和第 21 天分别对两组实验兔皮下接种 1:1 CL 抗原/不完全佐剂和 1:1 CL-BSA 抗原/不完全佐剂进行加强免疫[22]。一周后开始每周一次地采集各实验兔耳中动脉血 1mL/只，进行实验室检测以判断动物模型是否构建成功，具体实验操作程序如图 2。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R759.1;R446.6

【参考文献】