分子印迹技术在血型鉴定和血型转化中的应用研究

发布时间：2020-05-06 21:09

【摘要】：输血反应是由于血型不匹配导致的机体产生的一种免疫反应,严重的输血反应会导致死亡。准确的血型鉴定是血型匹配的前提,而对于难以保证血型匹配的情况,如紧急输血时某种血型血源尤其是稀有血型血源短缺的情况下,为了防止输血反应的发生,需要将血细胞表面的血型抗原除去或者“屏蔽”以提供所需血型细胞的替代品,即通过血型转化消除红细胞血型抗原的免疫原性。所以血型鉴定和血型抗原免疫性的消除是避免输血反应的现有手段。常规的血型鉴定方法是观察红细胞是否与相应抗体发生凝集反应判断血型,但血型抗体尤其是稀有血型抗体的获取十分困难,而且蛋白质的保存运输成本较高,易受温度、pH等条件影响其活性;另一方面,采用聚乙二醇和聚多巴胺对红细胞进行包裹修饰的方法来消除红细胞的免疫原性取得了成功,这种包裹能消除所有血型抗原的免疫原性,但是包裹的“严密性”可能会影响红细胞行使除携氧外的其它生理功能,如物质转运、信号接收等。目的:通过引入分子印迹技术突破上述血型鉴定和血型化学转化法中的限制,实现血型鉴定的非蛋白鉴定和红细胞由B型向O型的特异性转化。方法:本论文根据B型抗原与A及O型抗原决定簇结构仅一个糖基分子的差异,设计并成功合成了能特异性识别B抗原末端特有糖基的分子印迹微球和分子印迹水凝胶,将两种材料分别应用于血型鉴定和血型转化中。结果:将分子印迹微球吸附在玻璃纤维试纸上后,它表现出对B型红细胞较强的特异性吸附作用而对A及O型红细胞的吸附较小,吸附后的试纸还能通过联用智能手机进行三原色光谱分析实现B型红细胞的鉴定;分子印迹水凝胶修饰的B型红细胞则与B抗体发生较弱的凝集反应,但A型红细胞仍与A抗体发生较强凝集反应,表明利用分子印迹水凝胶在血型转化应用中的潜力。结论:上述实验说明分子印迹方法的引入成功地实现了B型红细胞的非蛋白鉴定和红细胞由B型向O型的特异性转化,并且由于分子印迹方法具有通用性,因此有望将该方法应用于其它血型的鉴定和转化,分子印迹技术在临床输血治疗中展现出巨大的应用前景。
【图文】：

半乳糖,模板分子,结构式,血型抗原

成本和精密的实验室仪器成本，而将分于分子印迹的血型鉴定中的合成方法的同时实现对血型的不依赖于实验室性地屏蔽血型抗原在众多化学修饰法到血型转化中，，以期对特定血型抗原的饰法在血型转化中的应用限制。系统中，A、B、O 抗原结构仅表现为糖血型的抗原决定簇(糖蛋白中具有免疫半乳糖(B 型)，而 H 抗原(O 型抗原)末据这一差别可以设计分子印迹材料识的半乳糖分子的 1 号碳原子上的羟基基脱水形成 1,3 糖苷键，所以本论文采糖分子(苯基-D-吡喃半乳糖苷, P-Ga示)。

标准曲线,紫外可见光吸收,模板分子,标准曲线

图 2-1 模板分子的紫外可见光吸收标准曲线。0、50、100、200、300、400、500ppm 的模板分子的吸光度值分6、0.342、0.608、1.074、1.353，标准曲线的线性回归方程为 Y=0.000.9979，说明在浓度范围为 0-500ppm 时，模板分子的吸光度值与呈良好的线性相关，因此可以根据模板分子在 267 nm 左右的吸分子的浓度，后续的关于吸附实验中计算吸附量的公式为：Q= 0 0× 0× Q 为吸附量(mg/g)，A0为吸附前吸光度值，A 为吸附后上清液度值，C0为吸附前模板分子的浓度(μg/mL)，V 为溶液体积(mL料的质量(mg)。2 分子印迹功能单体的选择各 MIP 的分散性及平衡时的吸附量如表 2-1 所示：表 2-1 各 MIP 在 PBS 中的分散性及平衡吸附量
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.6

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