实时荧光定量PCR法与尿液流式细胞仪UF-1000i尿液细菌计数的比较研究

发布时间：2020-05-11 08:13

【摘要】：目的:应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法与尿液流式细胞仪UF-1000i两种方法对尿液细菌计数的基础性能进行比较研究,为临床快速诊断和治疗尿路感染提供可靠依据。方法:1.用紫外-可见分光光度法和麦氏比浊法对标准菌株ATCC27853(铜绿假单胞菌)和ATCC29212(粪肠球菌)进行细菌计数,比较两种方法的相关性以及吸光度和细菌浓度的关系。2.采用煮沸法、碱液煮沸裂解法,氯仿提取法对标准菌株ATCC27853(铜绿假单胞菌)和ATCC29212(粪肠球菌)进行细菌DNA提取,并应用FQ-PCR法进行扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳比较分析。3.将标准菌株ATCC27853(铜绿假单胞菌)和ATCC29212(粪肠球菌)制成不同浓度菌悬液(活菌和死菌),应用FQ-PCR法和细菌培养两种方法对尿流式细胞仪UF-1000i尿液细菌计数进行性能评价。结果:1.在麦氏浊度0.4-0.8范围内,铜绿假单胞菌和粪肠球菌吸光度(625nm波长处)和麦氏浊度有良好的线性关系。铜绿假单胞菌、粪肠球菌浓度为108CFU时,在波长为625nm处的吸光度值分别为0.163和0.155,麦氏浊度二者都为0.5。2.三种方法对铜绿假单胞菌DNA的提取效果相同;对粪肠球菌,煮沸法经PCR扩增未见对应的扩增产物,氯仿提取法和碱液煮沸裂解法提取DNA的效果相同。3.UF-1000i对两种菌检测的线性范围均在103-107CFU/ml,铜绿假单胞菌重复精密度CV在12.72%-19.46%之间,培养法为25.1%;粪肠球菌重复精密度CV在14.49%-15.57%之间,培养法为23.0%。UF-1000i和培养法对细菌计数测定无显著差异(p0.05);FQ-PCR法对两种菌检测的线性范围均在106-1011CFU/ml之间,铜绿假单胞菌和粪肠球菌的重复精密度CV分别在11.38%-19.76%之间、12.86-23.28之间。FQ-PCR法和培养法对细菌计数测定无显著差异(p0.05)。对死菌的检测,UF-1000i法检测铜绿假单胞菌和粪肠球菌的准确性分别为78.9%和94.7%;FQ-PCR法检测铜绿假单胞菌和粪肠球菌的准确性分别为81.5%和98.4%。培养法对两种菌检测的准确性为0%(不能培养出死菌)。结论:1.紫外-可见分光光度法可作为铜绿假单胞菌和粪肠球菌快速计数的方法。2.煮沸法、碱液煮沸裂解法,氯仿提取法三种方法均可提取铜绿假单胞菌的DNA;碱液煮沸裂解法,氯仿提取法可提取粪肠球菌的DNA,且碱液煮沸裂解法可提取更低浓度菌的DNA,煮沸法不能提取粪肠球菌的DNA。3.UF-1000i对铜绿假单胞菌、粪肠球菌计数的性能稳定,精密度高于细菌培养法和FQ-PCR法;准确性和FQ-PCR法、细菌培养法无显著差异,且可以准确的对死菌计数。
【图文】：

山西医科大学硕士学位论文2 结果2.1 两种菌不同麦氏浊度和紫外可见分光光度计在 625nm 处吸光度值的线性关系分别取麦氏浊度为 0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 的菌液，并用紫外可见分光光度计测A625nm值，，统计计算得出不同麦氏浊度和 A625nm吸光度值得线性关系如图 1 所示。

铜绿假单胞菌（菌液浓度×108cfu/ml）
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.12

【参考文献】

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2 张裕民;;可见分光光度法对3种细菌计数的研究[J];中国药事;2015年10期

3 陈锐;于珊;金静;杨大伟;刘向yN;;UF-1000i全自动尿液分析仪诊断及鉴别不同细菌致尿路感染的临床应用[J];海南医学院学报;2014年09期

4 董自艳;戴

本文编号：2658161