SIRT1在LPS诱导INS-1细胞氧化应激损伤中的作用

发布时间：2020-05-12 12:02

【摘要】：目的探讨沉默信息调节因子(Silent mating type information regulation 2homolog1,SIRT1)在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导INS-1细胞氧化应激损伤中的作用。方法于上海交通大学医学院附属新华医院内分泌科和瑞金医院内分泌研究所获取大鼠胰岛细胞瘤细胞株(Rat insulinoma cell lines-1,INS-1),将培养至对数生长期的INS-1细胞分成五组,分别是CON组(正常对照组)、1 mg/L LPS组(LPS作用细胞24 h),RSV+LPS组(10μmol/L RSV预处理1 h后,加入1 mg/L LPS作用24 h),EX527+LPS组(20μmol/L EX527预处理1 h后,加入1 mg/L LPS作用24 h),EX527+RSV+LPS(20μmol/L EX527预处理1 h后,加入10μmol/L RSV和1 mg/L LPS作用24 h)。用CCK8方法检测细胞活力;检测细胞内SOD活性,MDA、ATP及超氧化物生成;JC-1方法检测各组细胞线粒体膜电位变化;AnnexinⅤ方法检测细胞凋亡情况;透射电子显微镜下观察线粒体损伤程度;分离提取各处理组INS-1细胞的总蛋白,质蛋白和线粒体蛋白,Western blot法检测细胞中SIRT1、TLR4、乙酰化FoxO1蛋白表达以及细胞色素C(Cytochrome C,CytC)在细胞质内的释放,线粒体融合蛋白1(Mitofusion1,Mfn1),线粒体融合蛋白2(Mitofusion2,Mfn2)、线粒体分离蛋白1(Fission1,Fis1)的蛋白表达,Real-time PCR方法检测Mfn1、Mfn2、Fis1的基因水平。结果1.1 mg/L LPS作用于INS-1细胞24 h后,与CON组相比,INS-1细胞的细胞活力降低(P0.01),ATP生成减少(P0.05),SOD活性降低(P0.05),MDA生成增多(P0.01),超氧化物生成增加(P0.05),而RSV预处理后可以拮抗LPS诱导的细胞活力和SOD活性的降低,减少MDA和超氧化物的生成以及促进ATP生成;2.与LPS组比较,EX527预处理后降低ATP的生成。RSV却不能增加EX527预处理诱导的ATP生成的减少。RSV预处理能促进SIRT1、Mfn1、Mfn2蛋白表达和基因上调,降低TLR4表达,减少胞质中CytC的释放,分离蛋白Fis1的蛋白表达减少,Fis1基因水平下调(P0.01),而FoxO1蛋白表达无统计学意义(P0.05),FoxO1基因水平下调(P0.01)。3.LPS诱导INS-1细胞线粒体膜电位降低,线粒体肿胀,嵴结构紊乱,出现凋亡。RSV预处理可减轻线粒体功能和结构的损伤,减少细胞凋亡。结论1 mg/L的LPS诱导INS-1细胞产生氧化应激,RSV可能通过增强SIRT1的活性,调控下游转录因子FoxO1的乙酰化水平,部分参与调节LPS诱导的氧化应激对INS-1细胞及其线粒体的结构和功能造成损伤。
【图文】：

细胞活力,预处理,硕士学位论文,白藜芦醇

上海交通大学硕士学位论文RSV 预处理后可以增强 LPS 诱导的降低的 INS-1 细胞活力，约为1 倍（P <0.01），但是 EX527+LPS 组和 EX527+RSV+LPS 组与 LPS无统计学意义（P >0.05），且这两组间比较无统计学差异（P >0.0一定浓度白藜芦醇的预处理有利于增强 LPS 损伤所致 INS-1 细胞但是 RSV 并不能逆转 EX527 预处理后 LPS 诱导的细胞活力的降低

乙酰化,氧化应激,相关蛋白,蛋白表达

cP <0.01图2-2 不同处理组ATP产生比较Figure 2-2 Comparison of ATP production in different treatment groups4.3 氧化应激状态下INS-1细胞内的蛋白表达变化4.3.1 TLR4、FoxO1乙酰化可能参与LPS诱导的氧化应激过程10 μmol/L RSV，20 μmol/LEX527分别预处理1 h后，加入1 mg/L LPS培养INS-1细胞24 h后检测相关蛋白表达。图3所示，与CON组比较，LPS诱导INS-1细胞SIRT1表达降低，TLR4表达和FoxO1乙酰化水平增加（P <0.01），，EX527组和EX527+RSV+LPS组也出现SIRT1表达降低，TLR4和乙酰化FoxO1表达增加（P<0.01）
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R459.7

【参考文献】