两例复杂遗传性溶血性贫血患者及家系的基因突变分析

发布时间：2020-05-20 14:06

【摘要】：背景与目的:遗传性溶血性贫血(Hereditary hemolytic anemia,HHA)是由于编码红细胞膜蛋白、红细胞酶及血红蛋白的基因突变引起的一组遗传异质性贫血。先天性红细胞生成异常性贫血(Congenital dyserythropoietic anemia,CDA)是一种罕见的红细胞生成异常性疾病,通常表现为溶血性表型,故在HHA的鉴别中应加以考虑。对于常见的单基因突变引起的典型HHA患者可通过结合其临床表现、常规实验室的筛查指标及阳性家族史等得到确诊,但是越来越多的研究显示部分HHA患者存在多基因多位点突变,同时还可能存在非遗传性溶血因素,这些复合溶血因素的存在易造成漏诊或误诊,故对于复杂、罕见的HHA患者应进行基因检测以明确致病基因,以便及早地采取治疗或预防措施。本文分两部分,通过对两例复杂遗传性溶血性贫血患者及家系进行基因检测,确定其基因突变位点,并分析探讨基因突变位点与临床表型之间的关系,完善相关疾病基因突变谱,同时分析HHA合并非遗传性疾病时的临床特点及诊治过程,以减少HHA漏诊和误诊的发生。第一部分:遗传性球形红细胞增多症合并自身免疫性肝炎的研究方法:收集一例遗传性球形红细胞增多症(HS)先证者及其父母、祖母的临床资料,采集血液标本后进行血细胞分析、肝功能等常规项目的检测,然后对先证者的血液系统疾病相关基因全外显子编码区及剪切区序列进行高通量测序分析,确定其基因突变位点,用Sanger测序法对该基因突变位点进行验证,同时对其家系成员进行突变位点的检测。结果:血细胞分析结果显示,先证者的红细胞(RBC)及血红蛋白(Hb)正常,平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)及网织红细胞(RET)比值升高,平均网织红细胞体积(MRV)、平均红细胞体积(MCV)及平均球形红细胞体积(MSCV)降低;其父亲的RBC、Hb和MCHC均正常,RET升高,MRV、MCV、MSCV均降低,其母亲除MRV轻度降低外余各项参数均正常;其祖母有轻度贫血,RBC及MCHC正常,MRV、MCV、MSCV也降低;除母亲外其他成员均有MSCVMCV,MRV95.77fl。肝功能结果显示,先证者的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)及直接胆红素(DBIL)同时升高;其父亲和祖母的TBIL及IBIL升高;母亲的胆红素结果正常。此外,先证者免疫球蛋白IgG升高,自身免疫性肝病自身抗体谱检查示:抗核抗体(IgG型)弱阳性,抗平滑肌抗体(ASMA)阳性,滴度为1:320,结合肝穿刺病理检查结果诊断为自身免疫性肝炎(AIH)。高通量测序结果显示,先证者发现两个突变位点:SPTA1基因2号外显子c.134GA(p.R45K)和46号外显子c.6544GC(p.D2182H)复合杂合突变;Sanger测序验证了先证者的突变位点,其母亲检测出SPTA1基因c.134GA杂合突变,其祖母和父亲检测出SPTA1基因c.6544GC杂合突变。结论1.SPTA1基因c.6544GC杂合突变,可能与HS的发病机制相关,临床表型为轻型HS;SPTA1基因c.134GA杂合突变为良性变异的可能性大,而c.6544GC和c.134GA复合杂合突变时临床表型也为轻型HS。这两个突变位点在国内外均未见报道,为新突变。2.先证者肝功能异常的原因为HS合并AIH所致。第二部分:脱水遗传性口形红细胞增多症合并先天性红细胞生成异常性贫血Ⅱ型及自身免疫性溶血性贫血的研究方法:收集一例脱水遗传性口形红细胞增多症(DHSt)合并先天性红细胞生成异常性贫血(CDA)Ⅱ型的先证者及其父母、哥哥、姐姐和弟弟的临床资料,采集血液标本后进行血细胞分析、肝功能、Coombs试验、G6PD等常规项目的检测,同时行α及β地中海贫血基因检测,然后对先证者的血液系统疾病相关基因全外显子编码区及剪切区序列进行高通量测序分析,确定其基因突变位点,用Sanger测序法对该基因突变位点进行验证,同时对其家系成员进行该基因突变位点的检测。结果:血细胞分析结果显示,先证者存在中度贫血,RET、MCV和MCHC均正常;其父亲无贫血,RET比值轻度升高,MCV和MCHC均正常;其母亲、哥哥和姐姐的Hb正常,RET正常,RBC升高、MCV降低;其弟弟的Hb正常,MCV降低。肝功能结果显示,先证者及其弟弟的TBIL及IBIL均升高,余成员无异常。Coombs试验结果显示,先证者直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性,诊断为自身免疫性溶血(AIHA)。G6PD活性均正常。α及β地中海贫血基因检测结果显示:先证者和父亲的α-及β-珠蛋白基因未检出突变;其母亲和哥哥检测到α-珠蛋白基因3.7杂合突变合并β-珠蛋白基因17位点杂合突变,基因型为-α~(3.7)/αα、β~(17)/βN,姐姐检测到β-珠蛋白基因17位点杂合突变,弟弟检测到α-珠蛋白基因3.7杂合突变。高通量测序结果显示,先证者发现3个突变位点:PIEZO1基因c.4608_4615del(p.Gly1537Glufs*82)移码突变、SEC23B基因c.1571CT(p.Ala524Val)和c.2149GT(p.Ala717Ser)复合杂合突变。Sanger测序证实了先证者的上述3个突变位点,先证者的父亲检测到PIEZO1基因c.4608_4615del及SEC23B基因c.2149GT复合杂合突变,母亲和姐姐检测到SEC23B基因c.1571CT杂合突变,哥哥检测到SEC23B基因c.2149GT杂合突变,弟弟则检测到SEC23B基因c.1571CT和c.2149GT复合杂合突变。结论1.PIEZO1基因c.4608_4615del移码突变时临床表型为无症状的DHSt,该基因突变位点在国内外未见报道,为新突变。2.SEC23B基因c.1571CT杂合突变,临床表型为无症状的CDAⅡ型携带者,此突变位点已有文献报道。SEC23B基因c.2149GT杂合突变临床表型为无症状的CDAⅡ型携带者,此突变位点在国内外未见报道,为新突变。SEC23B基因c.1571CT和c.2149GT复合杂合突变时可能与CDAⅡ型的发病机制相关,临床表型为轻型CDAⅡ型患者。3.先证者溶血性贫血的原因可能是由DHSt合并CDAⅡ型及AIHA所致,同时存在遗传性和获得性的溶血因素。
【图文】：

巴细胞浸润15.11 阴性 7.870↑ 84.73↑ ml） 0.00 阴性 阴性 阴性 血红细胞形态学检查结果轻度大小不等，以小细胞为主，部分细胞占 18%（见图 1-2）。

祖母在 46 号外显子检测到 SPTA1 基因 c.6544G>C 杂合错义突变，，在 SPTA1 基因 2 号外显子检测到 c.134G>A 杂合错义突变，测序结 1-7，具体测序图见图 1-3A，1-3B。表 1-7 Sanger 测序结果突变位点 先证者 父亲 母亲 祖母1 chr1:158655028c.134G>A√ - √ -1 chr1:158587833c.6544G>C√ √ - √中“-”表示未检出突变位点，“√”表示检出突变位点）
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R556;R440

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本文编号：2672735