CRKP的碳青霉烯酶基因检测和同源性分析

发布时间：2020-05-20 13:10

【摘要】：目的:了解某三甲医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的临床分布特点,检测该医院CRKP菌株携带的碳青霉烯酶基因类型,并对其进行同源性分析,判断该医院流行的优势克隆株,为预防和控制CRKP的院内传播提供实验室依据。方法:(1)收集2017年01月至2017年12月间某大型三甲医院分离自临床各科室的22株CRKP,针对同一病患住院期间数次培养所得的相同菌株,仅纳入第一次培养阳性的CRKP菌株,并收集相应患者的诊疗资料,包括:实验室编号,性别,年龄,住院史,CRKP前住院时间,基础疾病,侵入性操作或治疗,使用的抗菌药物,是否使用激素,预后及分离科室,标本来源和对临床常见抗菌药耐药情况。(2)通过VITEK 2 Compact分析系统鉴定菌株和药物敏感性,其中革兰氏阴性细菌鉴定卡即GN鉴定卡用于菌株生化鉴定,革兰氏阴性细菌药敏卡即AST-GN13药敏卡用于细菌药敏鉴定,分别用药敏纸片扩散法和微量肉汤稀释法对上述药敏结果进行复核后采用改良Hodge试验(Modified Hodge Testing,MHT)及Carba NP试验两种试验方法检测菌株是否产碳青霉烯酶,使用PCR技术扩增产酶菌株的常见碳青霉烯酶基因(包括:blaKPC、blaSME、blaIMI、blaNDM-1、blaIMP、blaSIM、blaVIM、blaOXA-48)并对PCR扩增阳性的产物进行双向测定序列。(3)分别运用多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)及肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链反应(Enterobacterial repetitive intergenic consensusPolymerase chain reaction,ERIC-PCR)这两种方法分析22株CRKP间的亲缘性关系,即同源性分析。结果:(1)22株CRKP中有7株分离自该院新生儿科,6株分离自该院重症监护病房(Intensive Care Unit,ICU),4株分离自该医院脑血管外科,其余的5株CRKP菌株分别分离自该院呼吸内科、胸外科、全科及血液内科、肾内科;在22株CRKP中,从痰标本中分离出13株,血样中有5株,尿中有4株;对于以下两种抗菌药,22株CRKP保持60%的敏感率:阿米卡星及多粘菌素B,22株CRKP高度耐药于临床其他较常见的抗菌药物。(2)22株CRKP对厄他培南(Ertapenem,ETP)、亚胺培南(Imipenem,IPM)及美罗培南(Meropenem,MEM)的耐药率均为100%,22株CRKP中13株MHT阳性,14株Carba NP测试结果为阳性,PCR扩增后显示14株产酶菌株KPC基因阳性,测序后证实均为KPC-2基因,其中K12菌株同时携带NDM-1基因。(3)22株CRKP同源性分析结果显示:按MLST法分为四种序列型(Sequence type,ST),分别为ST11(14/22)、ST875(6/22)、ST1964(1/22)、ST571(1/22);按ERIC-PCR法分为三种型别,分别为A型(15/22)、B型(6/22)及C型(1/22)。结论:(1)CRKP主要分布于患者病情较重、免疫力低下及住院时间较长的新生儿科和ICU病房,其主要侵犯患者的呼吸系统且对临床大多数抗菌药物保持较高的耐药性。(2)产碳青霉烯酶是CRKP最主要的耐药机制,KPC-2基因是该院CRKP携带的最主要的耐药基因,其次还有NDM-1基因。(3)该院2017年存在ST11型和ST875型CRKP的克隆流行,需加强医院感染(Nosocomial infection,NI)的预防控制措施。
【图文】：

C25922：阴性对照；160109043：阳性对照；171205332：图 1 部分改良 Hodge 试验阳性结果图表 12 22 株 CRKP 改良 Hodge 试验结果表验号MHT阳性 阴K1 √K2 √K3 √K4 √K5 √K6 √K7 √K8 √K9 √10 √11 √12 √

结果判断标准参照2018版CLSI推荐的Carba NP 13 2018 版 CLSI 推荐 Carba NP 试验结果判断标准表b 管 色 橘红色、红色 色 黄色、深黄色、浅橘色 色 橘色 色、浅橘色、橘色 其他色 CRKP 中有 14 株细菌 Carba NP 试验结果阳性，8 14 株产生碳青霉烯酶，，Carba NP 试验的阳性结果ba NP 试验的结果如表 14 所示。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.5

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 贺吉童;倪文涛;王睿;吴春福;;多黏菌素联合用药治疗产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌体外研究进展[J];中国临床药理学杂志;2016年24期

2 王鹏鲲;陈定强;俞辉;;多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析[J];国际检验医学杂志;2016年24期

3 黄秋艳;邵世和;周海健;茆海丰;金丹婷;陈开勇;;耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌基因检测及其同源性分析[J];中国抗生素杂志;2017年01期

4 牛翠;杨靖;时东彦;;应用碳青霉烯酶失活法检测产碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌[J];中国感染与化疗杂志;2017年01期

5 徐建民;陈水平;陈建魁;;耐药性细菌碳青霉烯酶检测方法研究进展[J];标记免疫分析与临床;2017年03期

6 吴海燕;谭斌;张志军;姜梅杰;;某院院内耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌分子流行病学研究[J];中华实验和临床感染病杂志(电子版);2017年02期

7 黄小荣;梁昌盛;曹开源;;耐亚胺培南鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因研究[J];热带医学杂志;2017年08期

8 朱敏;邵彪;庞峰;赵岐刚;;碳青霉烯酶检测方法的研究进展[J];中国实验诊断学;2016年08期

9 张琪;程训民;沈继龙;;碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶和整合子的检测[J];中国抗生素杂志;2015年05期

10 鲁艳芝;;微生物关于碳青霉烯酶耐药机制的研究[J];赤峰学院学报(自然科学版);2015年22期

相关会议论文 前10条

1 茆海丰;黄秋艳;周海健;金丹婷;陈开勇;;肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因检测及其同源性分析[A];第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2016年

2 许春燕;郭锋;王静;魏剑锋;钱娇;彭敏飞;厉世笑;余素飞;;产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染的危险因素探讨[A];2014年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2014年

3 何京;冯军花;李燕;张金艳;;碳青霉烯酶检测研究进展[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年

4 胡丽庆;史煜波;孙定河;史颖娇;黄志刚;;宁波地区肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测研究[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年

5 王勇;李慧玲;张晓丽;范学才;;重症监护病房患者感染泛耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因的研究[A];第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2016年

6 吴丹丹;刘进;;39例碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯杆菌感染的临床分析[A];2009香港-北京-杭州内科论坛暨2009年浙江省内科学学术年会论文汇编[C];2009年

7 童照威;邱佳;沈斌;李晓峰;王伟洪;;2007~2014年耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌流行病学调查与耐药分析[A];2015年杭嘉湖感染性疾病学术年会暨国家级继续医学教育培训班论文汇编[C];2015年

8 杨婧;张彭;褚美玲;马均;任微;于静波;薛文成;;自动细菌鉴定药敏系统对肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶菌株检测评价[A];第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2013年

9 白永凤;祝进;陆军;程颖;余旭良;;耐碳青霉烯酶肠杆菌耐药基因及同源性分析[A];2015浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2015年

10 吴丹丹;刘进;;39例碳青霉烯耐药肺炎克雷伯杆菌感染临床分析[A];第二届传染病诊治高峰论坛暨2009年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2009年

相关重要报纸文章 前5条

1 北京中医药大学第三附属医院检验科 陶庆春　李亚娜;美国发布急救护理设施上碳青霉烯类耐药或产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌感染控制指南[N];科学时报;2011年

2 Helio S.Sader 等 吕文 编译;抗感染新药：新碳青霉烯和Trinem[N];中国高新技术产业导报;2001年

3 本报记者 胡彬;感染控制须多方携手并进[N];健康报;2019年

4 郭文;美日主导下的“培南”市场[N];医药经济报;2006年

5 严冰;市场有需求 老树冒新枝[N];医药经济报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 李小燕;产NDM-5碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的分子特征研究[D];南方医科大学;2017年

2 刘彩霞;耐碳青霉烯肠杆菌科细菌的耐药机制及MALDI-TOF在碳青霉烯酶快速检测中的应用研究[D];安徽医科大学;2018年

3 杨启文;中国碳青霉烯耐药肠杆菌科菌流行病学及耐药机制研究[D];北京协和医学院;2015年

4 胡燕燕;耐碳青霉烯革兰阴性杆菌分子流行病学及MALDI-TOF MS在碳青霉烯耐药决定子快速检测中的应用研究[D];浙江大学;2014年

5 毛梧宇;β-内酰胺酶荧光探针及其在耐药致病菌检测中的应用[D];华东理工大学;2017年

6 胡付品;碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的耐药机制及其所致医院感染控制研究[D];复旦大学;2010年

7 田雪;多利培南及其联合用药对不同碳青霉烯酶基因鲍曼不动杆菌体外和体内抗菌作用研究[D];第二军医大学;2013年

8 马广才;几类含铁酶和糖相关酶催化反应机理的理论研究[D];山东大学;2016年

9 郝莹莹;山东地区产NDM大肠埃希菌分子特征和传播机制研究[D];山东大学;2017年

10 刘丽琳;不动杆菌属OXA-23及OXA-24/40型碳青霉烯酶传播机制研究[D];浙江大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 钱夏娜;基于碳青霉烯探针的β-内酰胺酶抑制剂筛选和化学标签研究[D];华东理工大学;2019年

2 陈娅;CRKP的碳青霉烯酶基因检测和同源性分析[D];遵义医科大学;2019年

3 王娟;呼吸道CRE耐药机制及分子流行病学研究[D];湖南师范大学;2018年

4 刘香花;产碳青霉烯酶同时耐多粘菌素的肠杆菌科细菌的分子流行特点分析[D];宁夏医科大学;2018年

5 闫金荣;碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学初步研究[D];重庆医科大学;2018年

6 何京;多方法检测碳青霉烯酶对比研究[D];河北医科大学;2017年

7 孙坤玲;大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药分子机制研究及碳青霉烯酶表型检测方法评价[D];重庆医科大学;2017年

8 杨刚;鲍曼不动杆菌耐药性分析及产碳青霉烯酶状况的研究[D];新疆医科大学;2016年

9 陈振华;鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶检测及流行病学分析[D];中南大学;2010年

10 杜小幸;阴沟肠杆菌质粒介导的碳青霉烯酶及传播机制研究[D];浙江大学;2005年

本文编号：2672669