基于前端引发的滚环扩增和荧光共振能量转移检测microRNA

发布时间：2020-05-22 14:23

【摘要】：微小RNA(miRNAs)是类长度约为22个碱基的非编码RNA,在人体生理过程有重要功能。miRNAs的异常表达与多种疾病相关,例如癌症、代谢性疾病等。因此,miRNAs已经成为重要的疾病早期诊断标志物。检测细胞中微小RNA(miRNA)的含量有助于了解miRNA的生理功能,并研究其与疾病的关系。本论文第一章介绍了miRNA及检测miRNA的几种方法;并阐述了本文的主要内容及创新点。第二章介绍设计的用于检测miRNA的方法:利用toehold介导的链置换(TMSD)反应引发滚环扩增(RCA),实现待测miRNA的信号放大,这一过程称为TIRCA。将TIRCA的产物与分别连有FAM(6-羧基荧光素)和TAMRA(羧基四甲基罗丹明)两种荧光团的DNA链相连接,两种靠近的荧光团会产生荧光共振能量转移(FRET)。利用荧光聚集增强效应与两种荧光染料靠近产生的荧光共振能量转移,可以实现对miRNA的定性检测。这种方法可以更好的帮助我们分析miRNA在人类疾病中的作用。第三章介绍准备探究miR-494和miR-6126在不同细胞中的存在状态,进而探究它们的生理功能。选择出检测miR-6126的探针,验证了探针的成功合成并且反应产物的形成。为下一步探究miRNAs的生理功能奠定基础。
【图文】：

生物发生,途径

都会导致胚胎致死[43,44]。同样，任一基因的组织特异性敲除发育缺陷，这凸显了大多数组织类型对 miRNA功能的需求[研究是鉴定单个 miRNA的生物学作用的另一种方法。这些干扰的缺点，这可能导致数据的错误分析。然而，它们已被RNA家族庞大而在敲除研究中未检测到的生物学作用。此外常在疾病中发生改变，过表达研究可以模拟这种病理状态。A靶组鉴定一起揭示了 miRNA途径在体内大多数组织的发育miRNA与许多生理功能有关，例如 miRNA与神经元功能的括发育重塑和有丝分裂后神经元细胞存活等[46-49]。miRNA还功能有关，包括中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞、巨核细胞能[50-61]。

序列,切口,外切核酸酶,单链

MB的设计中的不对称性而不受非特异性切口的影响。一旦产生双链酶引入切口，该切口产生 λ外切核酸酶的识别位点。在切口两侧的λ外切核酸酶通过切口酶特异性地消化含有 5'-羟基末端的链，并保补的单链。结果，MB的序列被消化，并且其互补序列被再循环。是第二个扩增循环。由于靶标扩增不仅通过靶 miRNA本身的线性，而且通过新生成的单链 DNA的二次循环来诱导，因此可以检测靶 miRNA。另外，两个循环在同一反应中进行。因此，它可以方胞提取物。这种设计即使在单细胞水平也是可行的。然而，该方法离 miRNA，当只有一些体液样品可用时，该方法可能很麻烦，例3）。
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R440;O657.3

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