HIV暴露婴儿极早期诊断策略及其影响因素研究

发布时间：2020-06-20 19:57

【摘要】：研究背景人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)是全球面临的重大公共卫生问题,同样也严重威胁着妇女和儿童的健康与生命。因母婴传播感染HIV的婴儿病情进展快,2岁内死亡率达50%-60%。为降低此类婴儿夭折率,世界卫生组织(World Health Organizationg,WHO)曾指出0小时-48小时检测可提高感染婴儿生存率。根据我国目前HIV暴露婴儿早期诊断策略(Early Infant Diagnosis,EID),婴儿检测时间分别为6周龄及3月龄。现行诊断策略虽然有较高的敏感性及特异性,但延迟了检测时间,不能满足阳性婴儿尽早治疗的需要。由于HIV暴露婴儿出生后会携带来自母亲的HIV抗体(Antibody,Ab),目前HIV EID几乎完全依赖核酸定性检测。根据既往研究,由于灵敏度较高,被作为EID金标准的罗氏免疫缺陷病毒(1型)核酸检测试剂(罗氏V2.0)易产生假阳性检测结果,故而WHO推荐以循环阈值(Cycle threshold,Ct)33.0作为阳性检测结果评价标准。Ct为聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)中每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数,高Ct可能与样本病毒载量低(Viral Load,VL)相关。根据既往研究,有反应结果中高Ct结果出现率与样本采集年龄有关,婴儿检测年龄越低,将Ct纳入结果评价标准越能有效降低检测结果假阳率,但目前我国尚未将此标准纳入HIV暴露婴儿检测结果评价中。核酸定性检测成本高、操作复杂、对检测环境要求严格,因此制约了 EID在全国范围内推广。所以,亟待关于使用抗体检测辅助HIV EID的研究。根据既往研究,随着年龄的增长,阴性婴儿及阳性婴儿抗体变化趋势有明显差异。但既往文献往往侧重于描述二者S/CO的变化差异,而缺少关于特异性抗体条带变化差异的研究,故而关于阳性婴儿与阴性婴儿特异性抗体条带变化差异描述尚有不足。因此,本研究拟结合我国现有HIV EID策略,提前HIV暴露婴儿第一次接受核酸定性检测时间,以此作为极早期诊断策略,并寻找最优极早期诊断策略。根据WHO推荐HIV暴露婴儿早期检测结果评价标准,探索是否需将Ct纳入检测结果评价。并通过HIV暴露婴儿抗体S/CO与特异性抗体条带检测,探索暴露婴儿抗体变化规律,以期通过抗体检测结果辅助诊断HIV暴露婴儿感染状态。研究目的一、探索HIV暴露婴儿极早期诊断策略。二、研究在HIV暴露婴儿核酸定性检测中,是否需将Ct33.0作为检测结果阳性评价标准。三、了解HIV暴露婴儿出生后抗体变化规律,为通过抗体检测诊断暴露婴儿是否感染提供参考。研究对象及样本研究对象为云南、四川、新疆、广东、广西研究地区内怀孕36周后或产时才发现HIV感染的孕产妇分娩的婴儿,收集研究对象出生后不同年龄时足跟血制成的干血斑样本。婴儿实际感染情况诊断金标准参照《全国艾滋病检测技术规范(2015年修改版)》。研究设计及方法一、HIV暴露婴儿极早期诊断策略研究本研究共纳入199名HIV暴露婴儿,根据金标准,187名婴儿未感染HIV,12名感染HIV。结合WHO推荐诊断策略,本研究提出6种HIV暴露婴儿诊断策略。根据诊断策略,使用罗氏V2.0对199名研究对象0小时-48小时、48小时-4周、4周-6周及3月龄四个年龄段系列样本进行HIV核酸定性检测,使用SAS9.3计算不同年龄段及不同策略的检测敏感性、特异性及95%CI。二、Ct对婴儿早期检测结果评价的影响本研究共纳入243名HIV暴露婴儿提供的977份干血斑样本,根据金标准,224名婴儿未感染HIV,他们共提供891份样本;19名婴儿感染HIV,他们共提供86份样本。以Ct33.0作为核酸定性检测结果为阳性的评价标准,使用罗氏V2.0对研究对象4周以内、4周-3月、3月龄及以后共977份样本进行HIV核酸定性检测。统计该标准下样本检测结果。使用SAS9.3计算各年龄段检测敏感性、特异性及95%CI。重复检测Ct≥33.0样本,统计复检结果。三、HIV暴露婴儿抗体变化研究本研究共采集并检测20名未感染婴儿及4名感染婴儿0至6月龄连续样本72份,采集九月龄后来自18名未感染婴儿阴性样本20份,来自5名感染婴儿阳性样本9份。使用酶联免疫试剂检测研究对象出生、3月龄、6月龄系列样本抗体S/CO,使用Wilcoxon秩和检验或t检验,利用SAS9.3软件,对阴性婴儿和阳性婴儿同一年龄段S/CO的差异进行统计学分析;使用重组免疫印迹试剂检测研究对象出生时、3月龄、6月龄系列样本及9月龄后样本特异性抗体条带,观察阴性婴儿和阳性婴儿18月龄前样本特异性抗体条带变化差异。研究结果一、HIV暴露婴儿极早期诊断策略研究0-48小时内,可检测出7名阳性婴儿;3月龄时,可检出所有阳性婴儿。检测敏感性在0小时-48小时、48小时-4周、4周-6周、3月龄时分别为70.0%、87.5%、93.8%、100.0%;检测特异性分别为98.8%、99.6%、99.2%、100.0%。六种诊断策略中,均有少数婴儿被判定为无法确认感染状态。各策略敏感性分别为71.4%、87.5%、100.0%、95.7%、100.0%、100.0%;特异性均为100.0%。二、Ct对婴儿早期检测结果评价的影响将Ct33.0作为阳性定性检测结果评价标准,阳性结果样本有81份,不确定结果样本28份。4周龄前、4周-3月、3月龄后不确定结果样本占有反应结果样本比例随年龄增长而降低;各年龄段检测结果准确率均高于95.0%。将不确定样本排除后,3月龄后检测敏感性和特异性均为100.0%,共检测4周龄前阳性样本28份,检出25份;检测4周龄至3月龄阳性样本24份,检出22份,两个年龄段检测特异性分别为99.5%和100.0%。共复检不确定样本24份,20份结果为不反应,其中18份为阴性样本。。三、HIV暴露婴儿抗体变化研究阴性样本抗体S/CO随采集年龄增长而降低,阳性样本则呈先降低后增长趋势;两种样本出生、三月龄抗体S/CO间的差异均有统计学意义。在RIBA实验中,阴性样本所有特异性抗体条带随年龄增长逐渐消退,其具体消退速度与条带种类有关;阳性样本特异性抗体条带颜色在出生3月内呈消退趋势,各条带消退速度与阴性样本类似;3月龄后,gp160、gp41、p24条带开始阳转。研究结论一、婴儿出生0小时-48小时及48小时-4周两次检测结果为阳性即可诊断为感染,将其作为我国原有策略的补充策略,可将感染婴儿第一次检测出阳性时间提前6周。二、样本采集年龄越低,不确定样本出现率越高;评价检测结果时参考Ct能减少假阳性结果。因此,婴儿早期检测有必要参考Ct。三、感染婴儿与未感染婴儿抗体S/CO、特异性抗体条带变化规律有差异,该差异可辅助诊断婴儿是否感染HIV。
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R725.1;R440
【图文】：

早期诊断,条带,婴儿,策略

中国疾病预防控制中心２０１９年硕士毕业论文逦逡逑１．６．４邋ＲＩＢＡ结果解读逡逑（１）有效的实验结果需同时满足ＨＩＶ－邋（１＋２）抗体强阳性对照特异条带逡逑均出现、对照线清晰可见；ＨＩＶ－１抗体弱阳性对照可被判定为阳性，对照线清逡逑晰可见；以及ＨＩＶ抗体阴性对照无ＨＩＶ抗体特异条带出现，对照线清晰可见逡逑三个条件；逡逑（２）条带检测结果：以图２中强阳、弱阳、阴性质控检测结果为例，本研逡逑宄将条带颜色分为清晰明显（＋邋）（如强阳样本ｐ３１条带）、暗淡模糊（土）（如逡逑弱阳样本ｐ３１条带）、无（一）（如阴性样本Ｐ３１条带）三个等级，如图１。逡逑ｉ＇ｒ邋ｉ逦ｕｄ逡逑

婴儿,阴性,ELISA检测,月龄

２．３邋ＨＩＶ暴露婴儿抗体变化研究逡逑２．３．１样本收集逡逑共收集２０名ＨＩＶ阴性婴儿及４名ＨＩＶ阳性婴儿０、３、６月龄样本７２份；名阴性婴儿９月龄后样本２０份，５名阳性婴儿９月龄后样本９份。对７２份３、６月样本使用ＥＬＩＳＡ和ＲＩＢＡ两种检测方式进行检测，对２９份９月龄后使用ＲＩＢＡ进行检测。逡逑２．３．２邋ＨＩＶ暴露婴儿０－６月ＥＬＩＳＡ检测结果逡逑根据图３、图４所示２４名婴儿ＥＬＩＳＡ检测结果，３月龄时，１７／２０的阴儿ＩｇＧ抗体Ｓ／ＣＯ明显降低；６月龄时，所有阴性婴儿抗体Ｓ／ＣＯ均降低，４阴性婴儿在６月龄时抗体Ｓ／ＣＯ低于临界值。阳性婴儿０－３月抗体Ｓ／ＣＯ变势与阴性婴儿大体相同，但３月龄后开始升高。阴性婴儿出生时抗体Ｓ／ＣＯ高于阳性婴儿（户＜０．０５），邋３个月后该差异依然存在（Ｐ＝０．０４）；邋６月龄时阳儿抗体Ｓ／ＣＯ高于阴性婴儿，但二者差异无统计学意义（Ｐ＝0．ｌ0）。逡逑

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