甲氟喹联合X射线对胶质瘤细胞的杀伤作用及机制研究

发布时间：2020-06-27 00:11

【摘要】：放射治疗是是常用的胶质瘤治疗手段,但在放射治疗的过程中,由于胶质瘤细胞对X射线具有放射抵抗性,导致放射治疗效果不佳。放疗增敏剂能加强X射线的杀伤作用,增加放射治疗的效果。但放疗增敏剂存在一些缺点如:放疗增敏剂本身毒性大,不能顺利达到病灶等,因而限制了放疗增敏剂的应用。辐照损伤后的肿瘤细胞需要合成大量蛋白质来修复损伤。研究表明,甲氟喹能通过作用于80S核糖体亚基抑制蛋白质合成,且可通过线粒体途径诱导细胞凋亡;同时,甲氟喹具有能顺利到达病灶和毒性较低的优点。于是,本论文以上述几点为理论基础,研究了甲氟喹对胶质瘤细胞的放疗增敏作用。本文用细胞克隆形成实验方法评估甲氟喹对U251细胞和C6细胞的放疗增敏效果,并进一步对甲氟喹的U251细胞放疗增敏机制进行研究。采用CCK-8检测法研究甲氟喹联合X射线作用后1,3,6天后U251细胞存活率情况;并观察甲氟喹联合X射线作用后1,3,6天U251细胞的凋亡、自噬及衰老发生的水平,确定甲氟喹增敏U251细胞的细胞死亡形式;最后利用流式细胞仪检测了甲氟喹联合X射线作用后的U251细胞细胞周期、胞浆钙离子和胞浆活性氧水平,研究甲氟喹联合X射线作用后U251细胞死亡机制。本文结果显示,甲氟喹能明显降低X射线照射的胶质瘤细胞的存活分数,U251细胞的最大放疗增敏比为1.64,C6细胞的最大放疗增敏比为1.51,因而甲氟喹对胶质瘤细胞具有良好的放疗增敏效果。在死亡模式研究中,甲氟喹联合X射线作用后第一天U251细胞存活率下降并不明显,这与第一天U251细胞凋亡不明显,而保护性自噬水平升高有关;X射线联合甲氟喹作用于U251细胞第3天细胞凋亡的增加以及保护性自噬水平的下降;联合作用第六天后细胞凋亡进一步上升,但并不表现出衰老现象;因而甲氟喹放疗增敏效果主要归结于U251细胞发生细胞凋亡。甲氟喹联合X射线作用后于U251细胞凋亡的增加是由于胞浆活性氧水平升高诱导的。本论文研究甲氟喹的胶质瘤细胞放疗增敏效应,并探讨了其放疗增敏的机制,为甲氟喹放疗增敏剂的临床应用研究提供一定的理论依据。
【学位授予单位】：南京航空航天大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.41;R730.55;O434.1
【图文】：

电离辐射,诱导细胞,形式

南京航空航天大学硕士学位论文5图 1. 1 电离辐射诱导细胞死亡形式图1.1.4 细胞凋亡的机制活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）是指氧气在代谢和反应后生成的一些含氧产物。主要有①氧的单原子还原物如超氧阴离子 O2- 和 O- ，氢过氧基 HO2 、羟自由基 OH；②氧的双电子还原产物过氧化氢 H2O2；③烷烃过氧化物 ROOH、烷氧基 RO 、烷过氧基 ROO ④激发态的氧、单线态氧和羰基化合物。活性氧特征是含有氧，化学性质活泼，较基态氧氧化活性高[26-28]。细胞内的 ROS 分为内源性 ROS 和外源性 ROS。内源性 ROS 主要在线粒体呼吸链中产生。在哺乳动物细胞中，低水平的 ROS 在调节生物功能方面起着重要作用。然而，ROS 的过量产生会对细胞内生物大分子产生氧化损伤作用，从而导致细胞死亡。ROS 诱导的肿瘤细胞死亡类型包括凋亡、自噬和坏死[29-31]。由于癌细胞代谢异常，它们的 ROS 含量高于正常细胞。癌细胞内源性 ROS 水平越高

活性氧,凋亡,家族,甲氟喹

甲氟喹联合 X 射线对胶质瘤细胞的杀伤作用及机制研究嘌呤核苷酸转位酶(adenine nucleotide translocase，ANT)也与调控线粒体ndrialpermeabilitytransitionpore，MPTP)开启有关[34]。Cys403 位点的 pro过与凋亡蛋白酶活化因子-1（apoptoticproteaseactivatingfactor-1，Apaf-活化。同时，Katoh 等人提出了一种以氧化依赖的方式激活 caspase-9 H2O2诱导的二硫化物导致 caspase-9 的二聚体形成及其随后的自蛋白水控 Bcl-2 家族蛋白的活性，Bcl-2 家族蛋白为线粒体凋亡的主要调控因子可直接氧化 Bcl-2，从而降低其抗凋亡活性;②O2· 可以消除 Bax 和 Badl-2 的泛素化[35]。

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