NF-κB通路在γ辐射所致SH-SY5Y细胞损伤中的作用机制研究

发布时间：2020-07-12 21:16

【摘要】：背景:神经母细胞瘤病理分期中危组和高危组的患者,采取放射治疗可以显著增加肿瘤的局部控制率,提高患者生存率。然而,部分神经母细胞瘤患者的放射治疗效果不好,存在放疗抵抗的现象。文献报道,在肿瘤的放疗抵抗作用中,NF-κB(nuclear factor κB,NF κB)通路的激活起到重要作用。目的:本研究旨在探讨NF-κB通路在γ辐射所致SH-SY5Y细胞损伤中的作用功能与机制。方法:常规培养人神经母细胞瘤细胞—SH-SY5Y细胞系,不同剂量(0、0.2、0.5、2、5、10和20 Gy)γ射线照射细胞,分别在照射后不同时间点(4、8、24和48小时)收集细胞。(1)使用倒置显微镜观察SH-SY5Y细胞形态学改变。(2)采用MTT(Thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)实验检测SH-SY5Y细胞增殖数量。(3)采用PI染色流式细胞术检测SH-SY5Y细胞周期变化与凋亡细胞比例。(4)采用Western blot观察DNA损伤相关蛋白、NF-κB通路蛋白、凋亡通路相关蛋白的表达情况。(5)采用荧光定量PCR观察SH-SY5Y细胞凋亡通路相关基因、NF-κB通路基因和细胞增殖基因的表达情况。(6)P65-DNA结合实验检测NF-κB(P65)蛋白与DNA的结合活性。(7)双荧光素酶报告基因实验检测NF-κB(P65)蛋白的转录活性。结果:(1)SH-SY5Y细胞受到γ射线照射后,细胞肿胀,边缘毛糙,触角增多。随着照射后时间延长和照射剂量增大,上述形态学改变越明显。(2)与对照组相比,γ射线照射组的细胞数量呈现剂量依赖性减少(P0.01)。(3)与对照组相比,γ射线照射组的细胞凋亡比例和G2/M期细胞比例呈现剂量依赖性增加(P0.01)。(4)与对照组相比,γ射线照射组的细胞DNA损伤相关蛋白γH2ax、NF-κB通路蛋白p65与磷酸化p65、凋亡通路蛋白Cleaved Caspase-3与Parp的表达量增加。(5)与对照组相比,γ射线照射组的细胞NF-κB通路基因p65的表达上调(P0.01),凋亡通路基因Caspase-3、Bax和Parp的表达上调(P0.05),细胞增殖基因Pcna下调(P0.01),细胞周期调控基因p21上调(P0.01)。(6)与对照组相比,γ射线照射组的细胞NF-κB(P65)蛋白与DNA的结合活性增加(P0.05),NF-κB(P65)蛋白的转录活性增加(P0.01)。结论:(1)γ辐射可激活炎症、凋亡、DNA损伤通路,导致SH-SY5Y细胞损伤。辐射损伤效应包括促进SH-SY5Y细胞的凋亡、G2/M期阻滞和增殖抑制。(2)γ辐射可能通过NF-κB通路的激活导致SH-SY5Y细胞的损伤,p65蛋白是其中关键的转录因子。
【学位授予单位】：长江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R730.55;R739.4
【图文】：

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1 SH-SY5Y 细胞接受 0Gy 和 10Gyγ射线照射后 24、48 小时的细胞形态(x4Fig 1 The SH-SY5Y cell morphology changes after receiving γ irradiation射线照射对 SH-SY5Y 细胞增殖的影响 MTT 法检测 SH-SY5Y 细胞的生长，如图 2 所示，与对照组相比，0y、10 Gy、20 Gyγ射线照射组的 SH-SY5Y 细胞相对存活率降低，（P<相比，0.2 Gyγ射线照射组的细胞相对存活率无变化（P>0.05）。以胞的相对存活率随着辐射剂量的增加而降低，呈现剂量依赖性。

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Y 细胞接受 0Gy 和 10Gyγ射线照射后 24、48 小时he SH-SY5Y cell morphology changes after receivin射对 SH-SY5Y 细胞增殖的影响测 SH-SY5Y 细胞的生长，如图 2 所示，与20 Gyγ射线照射组的 SH-SY5Y 细胞相对存 Gyγ射线照射组的细胞相对存活率无变化（存活率随着辐射剂量的增加而降低，呈现剂

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第 2 章研究报告2.2.3γ射线照射对 SH-SY5Y 细胞周期和细胞凋亡的影响如图 3 所示，采用流式细胞仪对 PI 单染后的 SH-SY5Y 细胞进行细胞周期分析。如图 4A 所示，sub-G1 期的细胞代表着因辐射发生凋亡的细胞，与对照组相比，5 Gy、10 Gy、20 Gyγ射线照射组 sub-G1 期的细胞比例增加（P<0.01）。如图 4D所示，与对照组相比，10 Gy、20 Gyγ射线照射组 G2/M 期细胞比例增加（P<0.01）。以上结果说明，γ辐射可导致 SH-SY5Y 细胞发生 G2/M 期阻滞。γ辐射可诱导细胞凋亡，凋亡细胞比例随着辐射剂量的增加而增加，呈现剂量依赖性。

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