山西太原淋球菌多抗原序列分型以及mtrR、porB1b耐药基因的研究

发布时间：2020-07-24 01:58

【摘要】：目的:1.研究山西太原地区淋球菌临床分离株对头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、环丙沙星、大观霉素、四环素、青霉素七种药物的敏感性;2.采用NG-MAST初步探索山西太原地区淋球菌的基因型,把握本地区淋球菌不同基因型的流行状况,为疾病防控提供理论依据。3.分析山西太原地区淋球菌头孢菌素敏感性改变和耐药基因mtrR和porB1b的关系。方法:1.收集2017年9月-2018年12月间,山西医科大学第二医院皮肤科、泌尿外科、药敏室、山西疾病预防控制中心的淋球菌61株,用琼脂稀释法检测头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、环丙沙星、大观霉素、四环素、青霉素七种药物的药敏。2.提取其DNA,对por和tbpB基因片段进行扩增并测序,并在NG-MAST官网中分析每株菌的por和tbpB对应的等位基因号,以及NG-MAST基因序列,用MegaX软件对por和tbpB基因序列做进化树,用Bootstrap法对进化树的可靠性进行检验,分析序列的同源性。3.对药敏中的头孢曲松和头孢克肟低敏和耐药的菌株和其中一株敏感的菌株的DNA进行提取,扩增mtrR和porB1b基因片段并测序,对比分析其潜在突变。结果:1.头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、四环素、大观霉素、环丙沙星、青霉素的耐药率分别为0、0、4.92%、34.43%,9.8%,100%,100%。2.(1)61株淋球菌经测序分析,por一共得到44种等位基因,其中基因型por1132,por2001,por6993,por581是山西地区por的优势基因型。(2)tbpB一共得到26种等位基因型,其中tbpB4,tbpB186,tbpB1058,tbpB566是山西地区的优势菌型。(3)一共发现49种NG-MAST基因分型,其中新的基因型别有21种一共22株,而NG-MAST3305、NG-MAST2083是山西地区流行的MAST基因型。3.(1)9株低敏株中都发现了mtrR启动子位置的33位A的删失,A39T、G45D、H105Y氨基酸置换在低敏株中不完全发现,而敏感株中没有发现此突变。(2)9株低敏株和低敏株的porB1b氨基酸序列中全存在M18T、Q143K、S258R的置换,而A121D、A121G以及G120K只在低敏株中发现,在215位点所有菌株都存在置换。结论:1.四环素、大观霉素、环丙沙星、青霉素已不再适合山西地区淋球菌治疗,而头孢曲松、头孢克肟和阿奇霉素仍可用于山西太原地区淋球菌的治疗。2.(1)por等位基因号90、5692、1123可能为短链上同一来源基因型。(2)淋球菌的tbpB的进化图可以发现tbpB4、1601、446、75、447、156、1058的亲缘关系比较近,它们可能是短链上来源相同的基因型。(3)山西太原淋球菌新的基因型别较多,山西地区的淋球菌基因分型需要持久的监测。3.(1)mtrR启动子区第33位A的缺失与淋球菌药物敏感性降低可能有关,而A39T、G45D以及H105Y氨基酸的置换与淋球菌药物敏感性降低可能没有关系;(2)porB1b第120、121位点氨基酸序列突变可能影响淋球菌对头孢菌素的药物敏感性。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R446.5;R759.2
【图文】：

1株菌por（650bp）凝胶电泳图

18图 2-2 61 株菌 tbpB（550bp）凝胶电泳图：第一条泳道为 maker（M），最后一空为阴性对照（Y），序号依次为 1-61pB、por 等位基因以及 NG-MAST 基因分型分布图（表 2.2）基因（个数） por 等位基因（个数） 对应的 NG-MAST 基因分型（个4、1132（3）、1053、5924（2）、6176、7438、6485225、2083（3）、2318、1009110569、12778、New15 543、182、833（2）、6967、6986、1389、21831791、2051、4007（2）、11811931、New6、New7 2978（2）、7586（2）、6993、7910、105455061（2）、13051（2）、NewNew20、New4

图 2-1-1 mtrR 基因片段凝胶电泳图左到右依次为 maker、2、10、17、21、42、48、53、57、61、敏感株 38 号、B 标空白对照（Y）。porB1b（1000bp）基因片段凝胶电泳图（图 2-2-2）

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