新型尿有形成分分析仪UF-5000在快速筛查疑似尿路感染病人中的应用研究

发布时间：2020-07-24 03:34

【摘要】：研究背景及目的泌尿道感染(尿路感染)是社区人群和住院患者最常见的细菌感染之一,定量尿细菌培养仍是诊断尿路感染的“金标准”。然而,在疑似尿路感染的病人中,大部分定量尿细菌培养的结果为阴性,阴性率可以高达60%,甚至更高。此外,尿细菌培养程序至少需要24小时,并且需要临床实验室工作人员的大量手工操作。在临床实际操作中,当一名疑似尿路感染的病人就诊时,临床实验室无法快速提供尿细菌培养的病原体信息,因此,许多医生基于其自身的技术和经验,采用经验性抗生素用药方法,可引起抗生素的过度使用,增加尿路感染细菌的耐药性风险。近十多年来,自动尿液有形成分分析仪,如UF-1000i(Sysmex Corporation,Kobe,Japan),基于流式细胞术原理,在筛选尿培养阴性标本时或是一种快速筛查方法,这些方法已广泛用于评估疑似尿路感染的患者。自2018年,UF系列尿有形成分分析仪的升级版UF-5000开始推出,采用488nm波长的新型蓝色半导体激光器,同样基于荧光流式细胞术的检测原理。UF-5000内部分两个检测室,无核(SFch)通道和有核(CRch)通道,使用前向散射光、侧向散射光、侧向荧光和消偏振侧向散射光参数,可快速计数、识别和分类尿有形成分颗粒。UF-5000是一种新型、非常实用的尿分析仪,可根据细菌细胞壁结构不同,其荧光染色液结合力不同,利用其荧光信号来区分革兰阳性和革兰阴性细菌,从而提供极其有价值的尿细菌学信息,为指导尿路感染患者抗生素的使用提供重要依据。最新的一些研究表明,UF-5000在检测尿有形成分颗粒计数、分类方面展现出良好的性能,但用于评估其在筛查疑似尿路感染患者的性能方面鲜有报道。本研究旨在评估新型自动化尿有形分析仪UF-5000在筛查疑似尿路感染患者尿培养阴性的分析性能,并研究新细菌革兰染色信息(Bact-info)用于评估尿路感染细菌革兰染色阴/阳性与尿培养结果的相关性。方法研究对象来自浙江大学医学院附属第一医院2018年1月至2018年3月间,共566名疑似尿路感染的患者入组。其中82.7%(468/566)为住院患者,17.3%(98/566)为门诊患者。本研究由浙江大学医学院附属第一医院伦理委员会批准(伦理号:2017-703号)。所有样本均来自16-94岁的成年人(平均年龄:60岁),其中220例样本来自女性,346例来自男性患者。用无菌容器收集患者的洁尿或者清洁中段尿,并在2小时内完成各项检测。将每个样本分成两个无菌管,一管用于尿培养,另一管用UF-5000尿有形成分仪分析。为提高标本的一致性,本研究排除孕妇、儿童、婴儿和导尿患者标本,同时也排除了肉眼可见的含颗粒标本,以避免出现不稳定的结果干扰本次研究。尿路感染的排除诊断:细菌生长104CFU/mL,则判定为培养阴性。培养结果超过两种菌落生长且没有优势菌落生长的样本,则判定为培养污染,无需进一步做鉴定,样本中如果有优势菌生长则通过鉴定来区别。收集患者检测结果数据资料,分析UF-5000在快速筛查疑似尿路感染病人的中的应用价值。结果在566例尿培养中,161例为阳性(28.4%),405例为阴性(71.6%)。在161例阳性样本中,排除了 30例真菌阳性样本,其余131例为细菌阳性。在131例细菌阳性样本中,87例为单一菌生长,6例样本中分离出2种菌生长,38例样本有3种及以上菌生长,且未分离到优势菌。依据尿路感染细菌的感染率,从高到低分别是:大肠杆菌(n=33),肺炎克雷伯菌(n=16),奇异变形杆菌(n=14),粪肠球菌(n=8),金黄色葡萄球菌(n=5),屎肠球菌(n=5),铜绿假单胞菌(n=5),表皮葡萄球菌(n=2),无乳链球菌(n=2),咽峡炎链球菌(n=2),阴道加德纳菌(n=2),弗氏柠檬酸杆菌(n=1),缓症链球菌(n=1)和其他细菌(n=3);对于真菌(总共30例),分别为:白色念珠菌(n=14),光滑念珠菌(n=8),热带假丝酵母菌(n=4),季也蒙念珠菌(n=2)和其他念珠菌属(n=2)。在评估UF5000尿有形成分分析仪快速筛查疑似尿路感染病人的性能方面,首先将尿定量细菌培养菌落生长104CFU/mL定义为尿培养阴性结果。以尿培养结果为参考标准,采用ROC曲线分析细菌计数(BACT)和白细胞(WBC)计数值,并进行比较。结果显示,BACT曲线下面积(AUC)为0.961(95%可信区间[CI]=0.940-0.976),远大于 WBC(AUC=0.769,95%CI=0.729-0.805)。此外,无论是采用任何临界值,BACT的相应灵敏度和特异性均高于WBC计数值。鉴于筛查试验首先应当着重考虑低假阴性(FN)率,以及传统WBC计数值在诊疗尿路感染中的重要作用,采用BACT30/μL和/或WBC200/μL的逻辑规则时为最佳临床实践操作,其灵敏度为97.8%,特异性为74.6%,阳性预测值为46.9%,阴性预测值为99.3%,且与尿培养方法的一致性为78.9%,可减少61%不必要的尿培养。在鉴别细菌革兰阴和革兰阳性的能力方面,93例培养阳性标本中,UF-5000给出的BACT-info分类信息分别是:革兰阳性菌19例,革兰阴性菌50例,革兰阳性/阴性(Gram Pos/Neg?)14 例,未分类(Unclassified)10 例。使用 UF-5000的 BACT-info 信息正确识别了 67.7%(63/93)的病例,Cohen's kappa一致性为 0.775(x2=31.65,p0.001)。在14例革兰阳性/阴性标本中,其中只有一例为革兰阳性,13例为革兰阴性;在10个未分类的标本中,6例为革兰阳性,4例为革兰阴性。在分析UF5000细菌计数(/μL)与尿定量培养(CFU/mL)结果相关性方面,两者结果之间呈现较好等级相关性。将尿培养菌落计数分为4个等级,分别为:102～103CFU/mL,103～104CFU/mL,104～105CFU/mL,105CFU/mL。在 UF-5000上,当菌落计数102～103CFU/ml时,细菌计数中位数为2.0/μL(95%CI=1.6-23.0);当菌落计数103～104CFU/ml时,细菌计数中位数为7.8/μL(95%CI=2.2-40.7);当菌落计数104～1O5CFU/ml时,细菌计数中位数为47.1/μL(95%CI=39.5-303.3);当菌落计数大于1O5CFU/ml时,细菌计数中位数为8022.0/μL(95%CI=16110.9-25996.1),呈现出一定的等级相关性。结论UF-5000在快速筛查疑似尿路感染病人有较高的应用价值,可减少61%不必要的尿培养,在鉴别培养阴性标本中敏感性及阴性预测值极高,且可以提供革兰阴阳性细菌信息,对临床尿路感染治疗具有一定指导意义。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R691.3;R446.12
【图文】：

阴阳性,占比,细菌

３结果逡逑３．１尿培养结果逡逑在５６６例尿培养中，１６１例为阳性（２８．４％），邋４０５例为阴性（７１．６％），见图１。逡逑在１６１例阳性样本中，排除了邋３０例真菌阳性样本，其余１３１例为细菌阳性。在逡逑１３１例细菌阳性样本中，８７例为单一菌生长，６例样本中分离出２种菌生长，３８逡逑例样本有３种及以上菌生长，且未分离到优势菌。依据尿路感染细菌的感染率，逡逑从高到低分别是：大肠杆菌（ｎ＝３３），肺炎克雷伯菌（ｎ＝１６），奇异变形＋杆菌（ｎ＝１４），逡逑粪肠球菌（ｎ＝８），金黄色葡萄球菌（ｎ＝５），屎肠球菌（ｎ＝５），铜绿假单胞菌（ｎ＝５），逡逑表皮葡萄球菌（ｎ＝２），无乳链球菌（ｎ＝２），咽峡炎链球菌（ｎ＝２），阴道加德纳菌逡逑（ｎ＝２），弗氏杆檬酸杆菌（ｎ＝ｌ），缓症链球菌（ｎ＝ｌ）和其他细菌（ｎ＝３）；对于逡逑真菌（总共３０例）

尿路感染,季也蒙念珠菌,念珠菌属,光滑念珠菌

（ｎ＝２），弗氏杆檬酸杆菌（ｎ＝ｌ），缓症链球菌（ｎ＝ｌ）和其他细菌（ｎ＝３）；对于逡逑真菌（总共３０例），分别为：白色念珠菌（ｎ＝１４），光滑念珠菌＜；ｎ＝８），热带假逡逑丝酵母菌（ｎ＝４），季也蒙念珠菌（ｎ＝２）和其他念珠菌属（ｎ＝２），见图２。逡逑尿培养结果逡逑■培养阳性■培养阴性逡逑图１．尿培养阴阳性结果占比逡逑６逡逑

细菌计数,菌落计数,中位数,相关性

数１０４？１０５ＣＦＵ／ｍｌ时，细菌计数中位数为４７．１／ｎＬ邋（９５％ＣＩ邋＝邋３９－５－３０３．３）；当菌逡逑落计数大于ｌ0５ＣＦＵ／ｍｌ时，细菌计数中位数为８０２２．＜ＶｐＬ邋（邋９５％ＣＩ邋＝逡逑１６１１０．９－２５９９６．１），结果见表６。由图４可见，ＵＦ５０００细菌计数结果与标准尿培逡逑养结果之间呈现较好等级相关性。逡逑表６．邋ＵＦ－５０００尿细菌计数与培养菌落计数的关系逡逑尿细菌菌落计数逡逑ＵＦ５０００邋细菌逦１０４－１０５逡逑１０２－１０３ＣＦＵ／ｍｌ逦１邋0Ｍ邋０４邋ＣＦＵ／ｍｌ逦＞１０５邋ＣＦＵ／ｍｌ逡逑计数／ｐＬ逦ＣＦＵ／ｍｌ逡逑ｎ＝３７逦ｎ＝１６逦ｎ＝１８逦ｎ＝７６逡逑平均值逦１２．３逦２１．４逦１７１．４逦２２０４４．５逡逑中位数逦２．０逦７．８逦４７．１逦８０２２．０逡逑１６１１０．９邋？逡逑９５％邋可信区间逦１．６邋？２３．０逦２．２－４０．７逦３９．５邋？３０３．３逡逑２７９７８．１逡逑标准差逦３２．０逦３６．２逦２６５．３逦２５９９６．１逡逑１２逡逑

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